• 在检测之前,将蛋白质样品隔离和纯化以去除杂质。 根据样品而定,杂质可以包括 DNA、RNA 和一些缓冲液组分。 有关详细信息,请参阅“制备样品”。
注 如果样品存在抽提试剂(即使是残留量)会增加处于 200 nm 和 280 nm 之间的吸光度,将会影响检测结果。 |
• 确保样品吸光度处于仪器的吸光度检测 范围内。
• 选择空白检测:
–对于蛋白质 A280 Pro 应用,使用用于再悬浮目标分析物的相同缓冲溶液进行空白检测。 空白检测溶液的 pH 值和离子强度应与分析物溶液相似。
• 运行空白检测周期评估缓冲溶液增加的吸光度。 如果缓冲液在分析波长处
(通常为 280 nm)附近表现出强吸光度,您可能需要选择不同的缓冲液
或应用,如比色法分析(例如,BCA 或 Pierce 660)。 有关详细信息,请参阅“选择和进行空白检测”。
注 缓冲液(例如,Triton X、RIPA 和 NDSB)会显著增加吸光度,并且与 A280 直接检测不相容。 |
• 用于微体积检测:
–确保基座表面已正确清洁和调节。 (蛋白质倾向于粘附在基座表面。)
–在进行检测之前,轻轻(但彻底)混匀样品。 混合和移取样品时,避免引入气泡。
–遵循微体积检测的最佳实践。
–使用 2 µL 样品体积。 有关详细信息,请参阅“推荐的样品体积”。
• 检测微体积样品
• 基本仪器操作