蛋白质检测的最佳实践

在检测之前,将蛋白质样品隔离和纯化以去除杂质。 根据样品而定,杂质可以包括 DNA、RNA 和一些缓冲液组分。 有关详细信息,请参阅“制备样品”

注  如果样品存在抽提试剂(即使是残留量)会增加处于 200 nm 和 280 nm 之间的吸光度,将会影响检测结果。

确保样品吸光度处于仪器的吸光度检测范围内。

选择空白检测:

对于蛋白质A280、蛋白质A205 和蛋白芯片应用,使用用于再悬浮目标分析物的相同缓冲溶液进行空白检测。 空白检测溶液的 pH 值和离子强度应与分析物溶液相似。

对于蛋白质 BCA 法、蛋白质 Bradford 法和蛋白质 Lowry 法应用,使用去离子水 (DIH2O) 进行空白检测。

对于蛋白质 Pierce660 法应用,使用用于制作标准曲线的参考品溶液进行空白检测(参考品溶液不应含有蛋白标准品制备)。 有关详细信息,请参阅“使用标准曲线”。

运行空白检测周期评估缓冲溶液增加的吸光度。 如果缓冲液在分析波长处
(通常为 280 nm或 205 nm)附近表现出强吸光度,您可能需要选择不同的
缓冲液或应用,如比色法分析(例如,BCA 或 Pierce 660)。 有关更多信息,请参阅“选择和进行空白检测”

注  缓冲液如 Triton X、RIPA 和 NDSB 会显著增加吸光度,并且与直接的 A280 或 A205 检测不兼容。

用于微体积检测:

确保基座表面已正确清洁调节。 (蛋白质倾向于粘附在基座表面。)

在进行检测之前,轻轻(但彻底)混匀样品。 混合和转移样品时,避免引入气泡。

遵循微体积检测的最佳实践。

使用 2 µL 样品体积。 有关详细信息,请参阅“推荐的样品体积”

对于比色皿检测(仅 NanoDrop UltraC 和 NanoDrop UltraC FL 仪器),请使用相容比色皿,并遵循比色皿检测的最佳实践。

 

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