在您从主屏幕的 Proteins(蛋白质)选项卡选择应用后,将显示蛋白质 A280
设置屏幕。 若要显示蛋白质 A280 设置,请在蛋白质 A280 检测屏幕中选择设
置图标。
蛋白质A280 应用提供各种用于纯化蛋白质分析的样品类型选项。
每个样品类型均采用唯一消光系数计算蛋白质。 如果样品的消光系数已知,可选择 e + MW(摩尔)或 e1%(质量)选项并输入数值。 否则,计算消光系数或选择最匹配样品溶液的选项。 如果您仅需要蛋白浓度的粗略估计且样品消光系数未知,则选择 1 Abs=1 mg/mL 样品类型选项。
提示 理想情况下,消光系数应该凭经验通过使用相同缓冲液的已知浓度研究蛋白质来确定。 |
设置 |
可用选项 |
质量消光 系数 (L/gm-cm) |
说明 |
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自动命名 |
打开或关闭 |
不适用 |
启用后,将为每份样品提供一个默认的基本名称“样品”,后跟序列中的样品编号。 |
打开或关闭 |
不适用 |
软件会从样品光谱中所有波长处的吸光度值,减去指定基线矫正波长处的吸光度值,以矫正光散射粒子导致的任何偏移。 因此,在指定基线矫正波长处的样品光谱吸光度为零。 提示:如果样品经修改在 340 nm 处吸光,选择不同的矫正波长或关闭基线矫正。
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样品类型a |
1 Abs = 1 mg/mL |
常规参考品 |
建议当消光系数是未知的且蛋白质浓度的粗略估计适合用于没有其他干扰物质的溶液时使用。 假设 0.1% (1 mg/mL) 蛋白质溶液在 280 nm 处产生 1.0A(光程为 10 mm), |
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BSA |
6.7 |
计算 BSA(牛血清蛋白)蛋白质浓度使用质量消光系数 (e),280nm 处吸光值为 6.7L/gm-cm 等于 1%(即 10mg/mL)BSA 溶液。 假设 MW 为 66,400 道尔顿 (Da),则 BSA 在 280 nm 处的摩尔消光系数约为 43,824 M-1cm-1。 |
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IgG |
13.7 |
适用于大多数哺乳动物抗体(即,免疫球蛋白 G 或 IgG)。 计算蛋白质浓度使用质量消光系数(e),280nm 处吸光值为 13.7L/gm-cm 等于 1%(即 10mg/mL)IgG 溶液。 假设 MW 为 150,000 Da,280nm 处用于 IgG 的摩尔消光系数大约为 210,000M-1cm-1。 |
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溶菌酶 |
26.4 |
计算溶菌酶蛋白质浓度使用质量消光系数(e),280nm 处吸光值为 26.4L/gm-cm 等于 1%(即 10mg/mL)溶菌酶溶液。 假定蛋白溶菌酶范围的摩尔消光系数介于 36,000M-1cm-1 和 39,000M-1cm-1 之间。 |
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其他蛋白质 |
用户输入摩尔消光系数和分子量 |
假设蛋白质具有已知摩尔消光系数 (e) 和分子量 (MW),其中: (emolar)*10=(epercent)*(MWprotein) 输入单位为千道尔顿 (kDa) 的 MW 和摩尔消光系数 (e) , 单位为 M-1cm-1 除以 1000(即 e/1000)。 例如,对于摩尔消光系数为 210,000 M-1cm-1 的蛋白质,输入 210。 |
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其他蛋白质 |
用户输入的质量消光系数 |
假设蛋白质具有已知的质量消光系数 (e)。 输入 10 mg/mL (e1%) 蛋白质溶液的质量消光系数,以 L/gm-cm 为单位。 |
a若要添加或编辑用户自定义蛋白质,使用蛋白质编辑器。 |