制备样品和空白检测样品

制备样品

使用仪器检测样品之前,将其隔离和纯化。 商用样品隔离试剂盒可用于这些目的,或使用内部协议。 纯化后,目标分析物通常会溶解在含水缓冲溶液中,然后再进行检测。

提示:在分析波长处吸收光的任何分子将会增加用于计算样品浓度的总吸光
度值。

确保最终分析物浓度处于仪器的吸光度检测范围内

对于微体积检测,在进行检测之前,轻轻(但彻底)混匀每份样品。

混合和转移样品时,避免引入气泡。

 

溶解在极易挥发溶剂(如己烷)中的样品使用比色皿采样选项可获得最佳结果(仅适用于 NanoDrop Ultra 和 NanoDrop Ultrac FL 仪器)。

选择和进行空白检测

用于再悬浮样品分析物的缓冲液会增加吸光度。 空白检测可最小化样品检测时缓冲液成分导致的任何吸光度增加。 产生的样品谱图仅显示目标分析物的吸光度。

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为获得最佳结果:

对于大多数应用,使用用于再悬浮目标分析物的相同缓冲溶液进行空白检测。 空白检测溶液的 pH 值和离子强度应与分析物溶液相似。

检测每组样品之前,进行一次新的空白检测。 除非样品溶解在不同的缓冲溶液中,否则,不需要在检测每份样品之前进行仪器空白检测。

每 30分钟进行一次新的空白检测。

使用空白检测溶液执行样品检测之前,运行空白检测周期评估其适用性。

所产生光谱的整个光谱变化应小于 0.02 A 或 0.4 A(10 mm 当量;取决于具体应用),特别是在下述示例中的分析波长下。

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如果所产生光谱在分析波长周围大于 0.02 A 或0.4 A (10 mm 当量;取决于具体应用),该缓冲溶液可能会干扰样品分析,特别是低浓度样品。 有关详细信息,请参阅下文。

与空白检测有关的问题

执行空白检测之前,残余样品留在基座上或比色皿中。 (产生的样品光谱
可能会展现负吸光度值,表示在该光谱区域中,空白检测的吸光度高于样品的吸光度。)

空白检测在分析波长处展现的吸光度高于未知样品。 (如果用于空白检测的缓冲液成分和用于再悬浮样品的不同,检测结果将不正确。)

样品意外用于仪器空白检测。 (产生的样品光谱可能会展现负吸光度值,或者类似于典型纯核酸或蛋白光谱的镜像,如下述例子所示。)

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空白检测问题的解决方案

彻底清洁和/或修复上下基座,然后:

重新运行空白检测周期,或

使用新的适当等分缓冲溶液进行新的空白检测,然后检测新的等分未
知样品。

对于大多数应用,使用用于再悬浮目标分析物的相同缓冲溶液进行空白检测。
空白检测溶液的 pH 值和离子强度应与分析物溶液相似。