核酸检测的最佳实践

在检测之前,将核酸样品隔离和纯化以去除杂质。 根据样品而定,杂质可以包括 DNA、RNA、游离核苷酸、蛋白质、一些缓冲液组分和染料。 有关详细信息,请参阅“制备样品”

注  如果样品中存在抽提试剂(即使是残留量)如盐酸胍、苯酚 和 EDTA 会增加处于 230nm 和 280nm 之间的吸光度,将会影响检测结果。

确保样品吸光度处于仪器的吸光度检测范围内。

使用用于再悬浮目标分析物的相同缓冲溶液进行空白检测。 空白检测溶液的 pH 值和离子强度应与分析物溶液相似。

运行空白检测周期评估缓冲溶液增加的吸光度。 如果缓冲液在处于或接近分析波长处(通常为 260 nm)表现出强吸光度,则您可能需要选择不同的缓冲液或应用。 有关更多信息,请参阅“选择和进行空白检测”

用于微体积检测:

确保基座表面已正确清洁调节。

如果可能,在进行检测之前,应将高浓度或大分子样品(如 基因组或 λ 噬菌体 DNA)加热至 63 °C (145 °F),然后轻轻(但彻底)混匀。 混合和移液时,避免引入气泡。

遵循微体积检测的最佳实践。

使用 1 - 2 µL 样品体积。 有关详细信息,请参阅“推荐的样品体积”

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