计算

与其他蛋白质应用一样,蛋白质 A205 使用Beer-Lambert 等式基于样品的消光系数和光程关联吸光度和浓度。

此应用提供三个选项(如右侧所示),
可选择各检测样品的适当消光系数,联合 Beer 定律用于计算样品浓度。

如果样品的消光系数已知,可选择 e1%(质量)选项并输入数值。 否则,计算消光系数或选择最匹配样品溶液的选项。

提示:理想情况下,消光系数应该凭经验通过使用相同缓冲液的已知浓度研究蛋白质溶液来确定。

 

消光系数的可用选项

31,假设 205 nm 处的 e0.1% (1 mg/mL) = 31

范围,假设 205 nm 处的 e0.1% (1 mg/mL) = 27 + 120 * (A280/A205)

其他蛋白质,输入 1 mg/mL (e0.1%) 蛋白质溶液的质量消光系数,以 L/gm-cm 为单位

注:详细信息请参阅样品类型。

检测值

A205 吸光度

注:对于微体积吸光度检测和使用非标准(10 mm 以外)
比色皿进行的检测,光谱将归一化为 10 mm 光程当量。

 

蛋白质吸光度值使用标准化光谱图在 205 nm 处检测。
如果没有选择基线矫正,这是报告的 A205 值,以及用于计算蛋白质浓度的值。

如果选择基线矫正,则将报告 205 nm 处的标准化和基线矫正吸光度值,并用于计算蛋白质浓度。

A280 吸光度

也会报告 280 nm 处的标准化和基线矫正(如选择)吸光度值。

计算的蛋白质浓度基于 205 nm 处的吸光
度值、选择(或输入)的消光系数和样品光程。 也可应用一个单点基线矫正。

报告的浓度以质量为单位。 互联网上提供了计算器,用于根据样品序列,将浓度单位从质量转换为摩尔。

 

 

 

样品光程

对于微体积检测,软件将根据分析波长处的样品吸光度,选择最佳光程(介于 1.0 mm 和 0.03 mm 之间)。

对于比色皿检测,使用切换到比色皿模式后选择的光程(请参阅“比色皿设置”)。

显示的光谱和吸光度值归一化为 10 mm 光程当量。

 

 

 

报告值

蛋白质浓度。 以选中的单位(mg/mL 或 µg/mL)报告。 使用矫正蛋白质吸光度值基于 Beer-Lambert 等式计算。

方法。 确定与 Beer 定律联合使用以计算样品浓度的消光系数。

基线矫正。 选择用于基线矫正的波长,以及在该波长下检测到的吸光度。

位置。 显示检测结果是否取自基座或比色皿模式。

监测波长。 输入一个您期望在报告中纳入其吸光度值的额外波长。

质量消光系数(1% 溶液)。

 

 

搅拌器。 若某型号的比色皿未使用搅拌器功能,则将显示“Off(关闭)”。 当使用搅拌器功能时,会显示搅拌速度。

加热器。 将显示“Off(关闭)”或“On(开启)”,以表明比色皿端口在检测期间被加热。

实测温度。 将显示检测期间的比色皿端口温度。

目标温度。 将显示比色皿端口期望温度。