荧光检测的最佳实践

对于未检测的污染物,为求最高准确度,应该在与实验样品相同的条件下检测标准品。

在检测之前,将核酸样品隔离和纯化以去除杂质。 根据样品而定,杂质可以包括 DNA、RNA、游离核苷酸、蛋白质、一些缓冲液组分和染料。 有关详细信息,请参阅“制备样品”

确保样品浓度处于所选分析方法限值范围内

当所有溶液均处于室温 (18-28°C) 下时,NanoDrop Ultra 荧光检测可达到最佳性能。 温度波动会影响检测的准确度。

确保基座表面已正确清洁和调节。

检测前涡旋并离心。 混合和转移样品时,避免引入气泡。

遵循微体积检测的最佳实践。

使用 2 µL 样品体积。 有关详细信息,请参阅“推荐的样品体积”

在每次实验期间,您可以选择使用新的标准曲线或既往标准曲线。 为了最大限度地减少可能影响性能的变量,强烈建议对每个新的检测重新校准。

目前尚无数据可解释 NanoDrop™ Ultra dsDNA BR 荧光试剂(组分 A 中
的染料)的致突变性和毒性。 已知这些试剂均可与核酸结合。 采用与所有其他潜在突变原相同的安全预防措施处理缓冲液,并根据当地法规处置染料。

NanoDrop™ Ultra RNA HS 荧光检测含高质量 rRNA 标准品。 保持标准
品的完整性和浓度对于达到最佳性能至关重要。 因此,我们强烈建议像处理任何其他 RNA 一样谨慎地处理 rRNA 标准品。 包括:

使用适当的不含 RNAse 处理技术,例如不含 RNAse 的手套、移液器吸头和试管。

请务必尽可能保持试管盖闭合。

抽取样品时,避免移液器触碰试管内壁。

使用后,建议立即将 rRNA 标准品放回冰箱。

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检测微体积样品

微体积检测的最佳实践

基本仪器操作

 

使用标准曲线

荧光分析需要使用标准曲线。

每项实验均需使用标准曲线。 您可以运行新的标准曲线或从之前运行的实验中导入标准品。

若要导入之前运行的标准曲线,选择应用设置屏幕中的 Load standards
(加载标准品)选项,突出显示之前运行的标准曲线,并选择
Save(保存)。

若要生成新的标准曲线,选择应用设置屏幕中的 Setup standards(设置标准品)选项。 对应用特定设置进行必要的更改,然后选择 Save(保存)。

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注  NanoDrop Ultra BR 和 HS 荧光检测需要 2 份标准品。

在开始分析样品之前,检测所有标准品。 在检测第一份样品后,不允许对标准曲线作出任何更改。

在您检测标准品时,会出现一个对话框屏幕,提示用户检测剩余的标准品。

CH6_Image_1.png

 

向左滑动一个屏幕可在您创建标准曲线时查看。 我们来看一个例子:

CH6_Image_2.png

 

当使用荧光计应用时,将显示 R2值并表示标准曲线拟合标准品数据点的程度(1.0 表示完美拟合;所有的点恰好处于曲线上)。

向左滑动一个屏幕可查看标准品的数据表。 我们来看一个例子:

CH6_Image_3.png

 

按住任何先前屏幕上的行来查看单独的标准品。 示例如下:

CH6_Image_4.png

 

在就选定曲线类型检测这两份标准品后,将显示下述相似信息:

CH6_Image_5.png

 

Remeasure standards(重新检测标准品): 返回至标准检测屏幕,
可以在其中选择先前运行的标准品检测并重新运行。

在标准曲线屏幕或标准品数据表中,按住待重新检测的标准品行以显示 Sample Details(样品详细信息)框。

选择 Remeasure(重新检测)

Load more standards(加载更多标准品): 返回至设置屏幕,您可以添
加需要检测的其他标准品。 共计可以使用 1 种对照品和 7 种标准品。 当使用 dsDNA 荧光或 RNA 荧光应用时此选项不会出现,因为这些应用必须使用 2 种
标准品。

Measure samples(检测样品):继续访问样品检测屏幕。

注  完成两种标准品的检测后,应出现“Standards Completed(标准品检测已完成)”消息。 如果在检测所有标准品溶液后出现“Invalid Standards(无效标准品)”消息,请尝试使用正确的标准物质重新检测标准品。