使用考马斯亮蓝染料比色法检测试剂来检测未纯化蛋白质样品的总蛋白浓度。 |
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蛋白质 Bradford 法分析的原理
蛋白质Bradford 法分析采用蛋白诱导吸光度变化考马斯亮蓝染料来确定总蛋白浓度。 结合蛋白染料复合物在 595nm 处检测和使用 750nm 处的吸光度值进行基线矫正。 我们或本地经销商均有提供预先配制的试剂盒,包含考马斯亮蓝染料、酒精和表面活性剂的稳定试剂混合物。
若要最大化蛋白质 Bradford 法分析的可靠性:
• 快速工作,不让制备标准品或样品的闲置时间过长。 考马斯亮蓝染料-染料和考马斯亮蓝染料-蛋白聚集体可随着时间形成颗粒,导致吸光度读数明显波动。
• 采用新的等分为每个检测以一式三份的方式检测标准品和样品。 对于基座检测,在 595 nm 处的全分析物(蛋白质-染料)信号由于基座的 1.0 mm 光程、考马斯亮蓝染料浓度和酸性 pH 值而被限制为 ~0-0.150A。
注 如果您拥有 NanoDrop UltraC 或 NanoDrop UltraC FL 型仪器,使用比色皿选项将获得更强的吸光度信号。 |
有关NanoDrop Ultra 仪器的最新试剂盒和方案,请访问 NanoDrop 网站。 遵循检测试剂盒制造商对所有标准品和样品(未知)提供的建议。 确保每份样品在整个检测过程中的时间设置和温度均相同。
试剂盒制造商也提供了用于产生标准曲线的蛋白质标准品。 由于 NanoDrop Ultra 基座可以比基于比色皿的传统分光光度计检测更高的蛋白质浓度,因此您可能需要提供浓度高于制造商所提供样品的自备蛋白质标准品。 例如,可能需要额外的标准品来确保标准曲线覆盖分析方法的动态范围以及未知样品的预期范围。
蛋白质 Bradford 法标准曲线
比色法蛋白质分析需要使用标准曲线。
• 每项实验均需使用标准曲线。 您可以通过选择 Setup standards
(设置标准品)选项运行标准曲线,或通过从应用设置屏幕选择 Load Standards(加载标准品)从之前运行的实验导入标准品。
有关详细信息,请参阅“使用标准曲线”。