与其他蛋白质应用一样,蛋白质 A205 使用Beer-Lambert 等式基于样品的消光系数和光程关联吸光度和浓度。 此应用提供三个选项(如右侧所示), 如果样品的消光系数已知,可选择 e1%(质量)选项并输入数值。 否则,计算消光系数或选择最匹配样品溶液的选项。 提示:理想情况下,消光系数应该凭经验通过使用相同缓冲液的已知浓度研究蛋白质溶液来确定。 |
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• 31,假设 205 nm 处的 e0.1% (1 mg/mL) = 31 • 范围,假设 205 nm 处的 e0.1% (1 mg/mL) = 27 + 120 * (A280/A205) • 其他蛋白质,输入 1 mg/mL (e0.1%) 蛋白质溶液的质量消光系数,以 L/gm-cm 为单位 注:详细信息请参阅样品类型。 检测值 注:对于微体积吸光度检测和使用非标准(10 mm 以外)
• 蛋白质吸光度值使用标准化光谱图在 205 nm 处检测。 • 如果选择基线矫正,则将报告 205 nm 处的标准化和基线矫正吸光度值,并用于计算蛋白质浓度。 |
计算的蛋白质浓度基于 205 nm 处的吸光 报告的浓度以质量为单位。 互联网上提供了计算器,用于根据样品序列,将浓度单位从质量转换为摩尔。 |
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• 对于微体积检测,软件将根据分析波长处的样品吸光度,选择最佳光程(介于 1.0 mm 和 0.03 mm 之间)。 • 对于比色皿检测,使用切换到比色皿模式后选择的光程(请参阅“比色皿设置”)。 • 显示的光谱和吸光度值归一化为 10 mm 光程当量。
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• 蛋白质浓度。 以选中的单位(mg/mL 或 µg/mL)报告。 使用矫正蛋白质吸光度值基于 Beer-Lambert 等式计算。 • 方法。 确定与 Beer 定律联合使用以计算样品浓度的消光系数。 • 基线矫正。 选择用于基线矫正的波长,以及在该波长下检测到的吸光度。 |
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• 搅拌器。 若某型号的比色皿未使用搅拌器功能,则将显示“Off(关闭)”。 当使用搅拌器功能时,会显示搅拌速度。 |