蛋白质 Bradford 法分析采用考马斯亮蓝染料作为比色法检测试剂来确定未纯化蛋白质样品的总蛋白质浓度。 这个应用对于检测组件在 200nm 和 280nm 之间显著增加吸光度的要求较低检测灵敏度的稀释蛋白溶液或蛋白非常有用,它排除了在 280nm 或 205nm 处直接蛋白检测的规则。 该应用检测 595 nm 处的吸光度,并使用标准曲线来计算蛋白质浓度。 有关详细信息,请参阅“使用标准曲线”。 应用了一个单点基线矫正。
开始之前...
使用 NanoDrop Ultra 仪器进行基座检测之前,抬起仪器检测臂,然后清洁上下基座。 至少需使用新的实验室抹布擦拭基座。 有关详细信息,请参阅“清洁基座”。
注意 • 不要在仪器附近使用喷射器或喷雾瓶,因为液体会流入仪器并可能导致永久性损坏。 • 不要在基座上使用氢氟酸 (HF)。 氟离子会永久损坏石英光纤电缆。 |
程序
1. 在主屏幕上,选择 Proteins(蛋白质)选项卡,然后选择 Protein Bradford(蛋白质 Bradford 法)。
2. 配置任何所需设置选项,然后选择 Save (保存)。 (指定曲线类型以及每份标准品的重复检测次数,并输入每份标准品的浓度。
提示:对于该分析,将 Curve Type(曲线类型)设为“二阶多项式”,并将 Replicates(重复样品)设为 3。
3. 如果使用 NanoDrop Ultrac或 NanoDrop Ultrac FL 型仪器,请选择正确的检测途径。
–使用比色皿时,从屏幕顶部下拉菜单选择 Cuvette(比色皿),而这将显示比色皿设置。 选择所需光程、搅拌速度和加热,然后关闭下拉菜单。
–使用基座进行检测时,确保 Pedestal(基座)设置为屏幕顶部的选
定设置。
4. 进行空白检测:
–将 2µL DI H2O 移取至下基座,然后降下检测臂,或将 DI H2O 空白检测比色皿插入比色皿架。
提示:如果使用比色皿,确保比色皿光路对准仪器光路。
–选择 Blank(空白检测)并等待检测完成。
提示:如果自动检测设为 On(开启),标准品检测将会在您降下检测臂后自动开始。 (此选项不适用于比色皿检测。)
–抬起检测臂,用新的实验室抹布擦拭上下基座,或取下比色皿。
5. 检测参考品标准品:
–将 2µL 参考品溶液移取至基座,或插入参考品比色皿(参考品溶液不应含有蛋白质标准品储备液;有关详细信息,请参阅“使用标准曲线”)。
–选择 Measure(检测)并等待检测完成。
–抬起检测臂,用新的抹布擦拭上下基座,或取下比色皿。
–如果重复设置大于 1,重复检测。
6. 检测剩余标准品:
–将 2 µL 标准品 1 移取至基座,或插入标准品1 比色皿。
–选择 Measure(检测)并等待检测完成。
–抬起检测臂,用新的抹布擦拭上下基座,或取下比色皿。
–如果重复设置大于 1,重复检测。
–对各额外标准品重复上述子步骤(检测指定数量的标准品和重复样品后,将显示消息询问是否要加载更多标准品或开始检测样品)。
–如果完成检测标准品,则在使用本地控制软件的情况下选择 Measure Samples(检测样品)选项卡(向左滑动可查看标准曲线),或在使用 PC 控制软件的情况下选择 Curve(曲线)选项卡。
7. 检测样品:
–将 2µL 样品 1 移取至基座,或插入样品 1 比色皿。
–选择 Measure Samples(检测样品)并等待检测完成。
–抬起检测臂,用新的抹布擦拭上下基座,或取下比色皿。
–如果重复设置大于 1,重复检测。
8. 在您完成样品检测后,选择 End Experiment(结束实验)。
9. 抬起检测臂,用新的抹布擦拭上下基座,或取下样品比色皿。
• 使用标准曲线
• 检测微体积样品
• 基本仪器操作