使用蛋白质A280 应用定量分析包含氨基酸(如色氨酸和酪氨酸,或半胱氨酸-半胱氨酸的二硫键)的纯化蛋白质群体,它在 280nm 处显示吸光度。 此应用报告 280 nm 处检测的蛋白质浓度和一个吸光度比 (A260/A280)。 也可使用一个单点基线矫正。 此应用不需要标准曲线。
开始之前...
使用 NanoDrop Ultra 仪器进行基座检测之前,抬起仪器检测臂然后清洁上下基座。 至少需使用新的实验室抹布擦拭基座。 有关详细信息,请参阅“清洁基座”。
注 如果您的样品中含有主要的肽键和很少或没有氨基酸,请使用蛋白质A205 应用而不是蛋白质 A280。 |
注意 • 不要在仪器附近使用喷射器或喷雾瓶,因为液体会流入仪器并可能导致永久性损坏。 • 不要在基座上使用氢氟酸 (HF)。 氟离子会永久损坏石英光纤电缆。 |
程序
1. 在主屏幕上,选择 Proteins(蛋白质)选项卡,然后选择 Protein A280
(蛋白质 A205)。
2. 配置任何期望设置选项,并选择 Save(保存)。
3. 如果使用 NanoDrop Ultrac或 NanoDrop Ultrac FL 型仪器,请选择正确的检测途径。
–使用比色皿时,从屏幕顶部的下拉菜单中选择比色皿显示比色皿设置。
选择所需光程、搅拌速度和加热,然后关闭下拉菜单。
–使用基座进行检测时,确保 Pedestal(基座)设置为屏幕顶部的选定
设置。
4. 将 1-2µL 空白检测溶液移取至下基座并降下检测臂,或将空白检测比色皿插入比色皿架。
提示:如果使用比色皿,确保比色皿光路对准仪器光路。
5. 选择 Blank(空白检测)并等待检测完成。
提示:如果自动空白检测设为 On(开启),空白检测将会在您降下检测臂后自动开始。 (此选项不适用于比色皿检测。)
6. 抬起检测臂,用新的实验室抹布擦拭上下基座,或取下空白检测比色皿。
7. 将 2-2 µL 样品溶液移取至基座,或将样品比色皿插入比色皿架。
8. 开始样品检测:
–基座:如果自动检测设为 On(开启),则降下检测臂;如果设为
Off(关闭),则降下检测臂并选择 Measure(检测)。
–比色皿:选择 Measure(检测)。
样品检测完成后,将显示光谱和报告的数值(请参阅下一个章节)。
9. 在您完成样品检测后,选择 End Experiment(结束实验)。
10. 抬起检测臂,用新的抹布擦拭上下基座,或取下样品比色皿。