检测蛋白质 A280

使用蛋白质A280 应用定量分析包含氨基酸(如色氨酸和酪氨酸,或半胱氨酸-半胱氨酸的二硫键)的纯化蛋白质群体,它在 280nm 处显示吸光度。 此应用报告 280 nm 处检测的蛋白质浓度和一个吸光度比 (A260/A280)。 也可使用一个单点基线矫正。 此应用不需要标准曲线。

开始之前...

使用 NanoDrop Ultra 仪器进行基座检测之前,抬起仪器检测臂然后清洁上下基座。 至少需使用新的实验室抹布擦拭基座。 有关详细信息,请参阅“清洁基座”

注  如果您的样品中含有主要的肽键和很少或没有氨基酸,请使用蛋白质A205 应用而不是蛋白质 A280。

注意    

不要在仪器附近使用喷射器或喷雾瓶,因为液体会流入仪器并可能导致永久性损坏。

不要在基座上使用氢氟酸 (HF)。 氟离子会永久损坏石英光纤电缆。

程序

1. 在主屏幕上,选择 Proteins(蛋白质)选项卡,然后选择 Protein A280
(蛋白质 A205)。

2. 配置任何期望设置选项,并选择 Save(保存)。

3. 如果使用 NanoDrop Ultrac或 NanoDrop Ultrac FL 型仪器,请选择正确的检测途径。

使用比色皿时,从屏幕顶部的下拉菜单中选择比色皿显示比色皿设置。
选择所需光程、搅拌速度和加热,然后关闭下拉菜单。

使用基座进行检测时,确保 Pedestal(基座)设置为屏幕顶部的选定
设置。

4. 将 1-2µL 空白检测溶液移取至下基座并降下检测臂,或将空白检测比色皿插入比色皿架。

 

提示:如果使用比色皿,确保比色皿光路对准仪器光路。

5. 选择 Blank(空白检测)并等待检测完成。

提示:如果自动空白检测设为 On(开启),空白检测将会在您降下检测臂后自动开始。 (此选项不适用于比色皿检测。)

6. 抬起检测臂,用新的实验室抹布擦拭上下基座,或取下空白检测比色皿。

7. 将 2-2 µL 样品溶液移取至基座,或将样品比色皿插入比色皿架。

8. 开始样品检测:

基座:如果自动检测设为 On(开启),则降下检测臂;如果设为
Off(关闭),则降下检测臂并选择
Measure(检测)。

比色皿:选择 Measure(检测)。

样品检测完成后,将显示光谱和报告的数值(请参阅下一个章节)。

9. 在您完成样品检测后,选择 End Experiment(结束实验)。

10. 抬起检测臂,用新的抹布擦拭上下基座,或取下样品比色皿。

 

112612_NanoDrop_One_Protein_A280_High_Drawing.png

 

112612_NanoDrop_One_Protein_A280_Low_Drawing.png