蛋白质 Pierce 660 法

使用专有比色法检测试剂来检测未纯化蛋白质样品的总蛋白质浓度。

检测蛋白质 Pierce 660 法

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蛋白质 Pierce 660 法分析的原理

蛋白质 Pierce660 法分析基于专有的染料金属络合物与蛋白在酸性条件下结合,在 660nm 处检测使染料的最大吸收转移。 染料金属络合物是红棕色,在蛋白质结合后变绿色。 颜色更改是由于在低 pH 值通过与蛋白质中带正电荷氨基酸基团相互作用通过质子化产生的。 染料主要与蛋白中碱性残基相互作用,如组氨酸、精氨酸和赖氨酸,以及在较小程度上的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。 在 660 nm 处检测反应产物,并使用 750 nm 处的吸光度值进行基线矫正。

在分析中产生的颜色是稳定的,并在广泛的范围内随增加的蛋白质浓度的比例增加。 可选的离子洗涤剂相容试剂 (IDCR) 可添加到检测试剂中以提高与大量离子洗涤剂的兼容性,包括 Laemmli SDS 样品缓冲液与溴酚蓝。 IDCR 在完全混合后会全部溶解,对检测无影响。 我们或本地经销商均有提供预先配制的蛋白结合材料试剂盒。 有关 IDCR 的信息,请咨询试剂盒制造商。

蛋白质检测试剂盒和方案

有关 NanoDrop Ultra 仪器的最新试剂盒和实验方案,请访问 NanoDrop 网站。 遵循测定试剂盒制造商对所有标准品和样品(未知)提供的建议。 确保每份样品在整个检测过程中的时间设置和温度均相同。

试剂盒制造商也提供了用于产生标准曲线的蛋白质标准品。 由于 NanoDrop Ultra 基座可以比基于比色皿的传统分光光度计检测更高的蛋白浓度,因此,您可能需要自备浓度高于制造商所提供浓度的蛋白标准品。 例如,可能需要额外的标准品来确保标准曲线覆盖未知样品的测定范围和预期范围。

蛋白质 Pierce 标准曲线

比色法蛋白质分析需要使用标准曲线。

每项实验均需使用标准曲线。 您可以通过选择 Setup  standards(设置标准品)选项运行标准曲线,或通过从应用设置屏幕选择 Load Standards(加载标准品)从之前运行的实验导入标准品。

有关详细信息,请参阅“使用标准曲线”。