计算

与其他蛋白质应用一样,蛋白芯片应用使用 Beer-Lambert 等式关联吸光度和浓度(基于样品的消光系数和浓度)。

此应用提供六个选项(如右侧所示),
可选择每个检测样品的适当消光系数,
联合 Beer 定律用于计算样品浓度。

如果样品的消光系数未知,可选择 e + MW(摩尔)或 e1%(质量)选项并输入数值。 否则,计算消光系数或选择最匹配样品溶液的选项。

提示:理想情况下,消光系数应该凭经验通过使用相同缓冲液的已知浓度研究蛋白质溶液来确定。

 

消光系数的可用选项

1 Abs = 1 mg/mL,样品类型和/或消光系数未知(产生粗略估计的的蛋白浓度)

BSA(牛血清蛋白,6.7 L/gm-cm)

IgG(任何哺乳动物抗体,13.7 L/gm-cm)

溶菌酶(蛋白溶菌酶,26.4 L/gm-cm)

其他蛋白质 (e + MW),用户指定摩尔消光系数

其他蛋白质 (e1%),用户指定质量消光系数

 

注:详细信息请参阅样品类型。

计算的蛋白质浓度基于 280 nm 处的吸光
度值、选择(或输入)的消光系数和样品光程。 可能会应用单点基线矫正(或分析矫正)。

报告的浓度以质量为单位。 互联网上提供了计算器,用于根据样品序列,将浓度单位从质量转换为摩尔。

 

 

检测值

A280 吸光度

注:850 nm 处的吸光度值从光谱中所有波长处的吸光度值减去。 因此,所显示光谱中 850 nm 处的吸光度值为零。 对于微体积吸光度检测和使用非标准(10 mm 以外)比色皿进行的检测,光谱将归一化为 10 mm 光程当量。

 

使用 850 nm-矫正和标准化光谱图检测 280 nm 处的蛋白质吸光度值。 如果没有选择分析矫正和染料矫正,这是报告的 A280 值和用于计算蛋白质浓度的值。

如果选择分析矫正,则将报告 280 nm 处的 850-矫正、
标准化和分析-矫正吸光度值,并用于计算蛋白质浓度。

如果使用染料,则将报告 280 nm 处的 850-矫正、标准化、分析-矫正和染料-矫正吸光度值,并用于计算蛋白质浓度。

染料浓度从染料分析波长处的吸光值、
染料的消光系数和样品光程计算。 也可使用染料斜率线矫正。

 

 

染料吸光度

染料吸光度在特定波长处检测。 有关使用的分析波长信息,请参阅“染料/色谱图编辑器”

如果选择了染料斜率矫正,400nm 和 850nm 之间将绘制一条线性基线,对于每个染料,将从每个染料分析波长处的吸光值,减去斜率基线的吸光值。 将显示基线矫正染料吸光值并用于计算染料浓度。

染料矫正

预定义染料具有 A260 和 A280 的已知矫正值。 有关所使用矫正值的信息,请参阅“染料/色谱图编辑器”

 

A280 染料矫正吸光度值从用于计算蛋白质浓度的 A280 吸光度值减去。

 

 

样品光程

对于微体积检测,软件将根据分析波长处的样品吸光度,选择最佳光程(介于 1.0 mm 和 0.03 mm 之间)。

对于比色皿检测,使用切换到比色皿模式后选择的光程(请参阅“比色皿设置”

显示的光谱和吸光度值归一化为 10 mm 光程当量。

 

 

 

报告

位置。 显示检测值是否取自基座。

监测波长。 输入一个您期望在报告中纳入其吸光度值的额外波长。

蛋白质浓度。 以选中的单位(mg/mL 或 µg/mL)报告。 使用矫正蛋白质吸光度值基于 Beer-Lambert 等式计算。

 

染料 1/染料 2 浓度。 以 pmol/µL 为单位报告。
使用(斜率)基线矫正染料吸光度值基于 Beer 定律等式计算。

染料 1/染料 2 标记程度。 规定每个结合物分子的平均荧光团分子数。

搅拌器。 若某型号的比色皿未使用搅拌器功能,则将显示“Off(关闭)”。 当使用搅拌器功能时,会显示搅拌速度。

加热器。 将显示“Off(关闭)”或“On(开启)”,以表明比色皿端口在检测期间被加热。

实测温度。 将显示检测期间的比色皿端口温度。

目标温度。 将显示比色皿端口期望温度。

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