Mesurer avec la méthode OD600

Utilisez l’application OD600 pour surveiller le taux de croissance de bactéries ou d’autres cultures de cellules microbiennes en mesurant la densité optique (absorbance) d’une culture en milieu de croissance à 600 nm.Le logiciel s’appuie sur la formule de Beer-Lambert et un facteur de conversion saisi par l’utilisateur pour corréler l’absorbance avec la concentration.Les valeurs de concentration rapportées peuvent servir à identifier la phase de croissance des populations de cellules cultivées (p. ex., logarithmique, exponentielle ou stationnaire).

L’application OD600 fournit la concentration cellulaire en cellules/ml.Il est aussi possible d’appliquer une correction d’absorbance à partir d’un seul point.Cette application ne nécessite pas de courbe d’étalonnage.

Avant de commencer...

Avant de procéder à toute mesure sur socle, relevez le bras de l’instrument NanoDrop Ultra et nettoyez les socles supérieur et inférieur.Au minimum, essuyez les socles avec une nouvelle lingette de laboratoire.Pour plus d’informations, consultez la rubrique Nettoyer les socles.

 

Remarque  Étant donné la faible quantité de lumière diffusée dans cette méth­ode, les valeurs d’absorbance obtenues sont généralement très basses.

AVIS   

N’utilisez pas de burette ou de flacon pulvérisateur sur ou à proximité de l’instrument car les liquides s’écouleraient dans l’instrument et pourraient causer des dommages irrémédiables.

N’utilisez pas d’acide fluorhydrique (HF) sur les socles.Les ions fluorures corroderaient irrémédiablement les câbles à fibre optique en quartz.

 

Procédure

1. Sur la page d’accueil, sélectionnez l’onglet More Apps (autres applications) puis appuyez sur OD600.

2. Modifiez autant d’ options de configuration que souhaité et sélectionnez Save (enregistrer).

3. Si vous utilisez un modèle NanoDrop Ultraou NanoDrop Ultra FL, sélectionnez le bon support d’analyse.

Si vous utilisez des Cuvettes, sélectionnez Cuvette dans le menu déroulant en haut de l’écran. Les paramètres relatifs aux cuvettes s’afficheront.Sélectionnez la longueur du trajet optique, la vitesse d’agitation et la température qui vous conviennent, puis fermez le menu déroulant.

Si vous mesurez à l’aide des socles, conservez le paramètre Pedestal (socle) sélectionné en haut de l’écran.

4. Pipetez 2 µl de solution de blanc (c.-à-d. Le milieu de culture des cellules d’intérêt) sur le socle inférieur et abaissez le bras, ou insérez une cuvette de blanc dans le porte-cuvette.

Conseil: si vous utilisez une cuvette, veillez à aligner son trajet optique à celui de l’instrument.

5. Sélectionnez Blank (effectuer le blanc) et attendez que la mesure soit terminée.

Conseil: si le mode Auto-Blank (blanc automatique) est activé, la mesure du blanc commencera automatiquement lorsque vous abaissez le bras.(Cette option n’est pas disponible pour les mesures en cuvettes.)

6. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette de blanc.

7. Pipetez 2 µl de solution d’échantillon sur le socle et abaissez le bras, ou insérez la cuvette d’échantillon dans le porte-cuvette.

8. Démarrez la mesure de l’échantillon :

Socle : si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé, abaissez le bras ; si le mode Auto-Measure est désactivé, abaissez le bras et sélectionnez Measure (mesurer).

Cuvette : selectionnez Measure (mesurer).

Une fois la mesure de l’échantillon terminée, le spectre et les valeurs rapportées sont affichés (voir la section suivante).

9. Lorsque vous avez terminé de mesurer les échantillons, sélectionnez End Experiment (terminer l’expérience).

10. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette d’échantillon.

Sujets connexes

Mesurer un échantillon micro-volume

Mesurer un échantillon à l’aide d’une cuvette

Préparer les échantillons et les blancs

Fonctionnement de base de l’instrument