Paramètres

L’application Protein A280 Pro propose diverses options en matière de type d’échantillon pour l’analyse de protéines purifiées.

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Chaque type d’échantillon applique un coefficient d’extinction unique aux calculs de concentration des protéines. Si vous connaissez le coefficient d’extinction de l’échantillon, choisissez l’option e + MW (molaire) ou e1 % (masse) et saisissez sa valeur. Dans le cas contraire, calculez le coefficient d’extinction ou choisissez l’option qui correspond le mieux à la solution d’échantillon. Si vous avez seulement besoin d’une estimation approximative de la concentration des protéines et ne connaissez pas le coefficient d’extinction de l’échantillon, sélectionnez l’option 1 Abs = 1 mg/ml dans le champ du type d’échantillon.

 

Tip  Il est préférable que le coefficient d’extinction soit déterminé de manière empirique à l’aide d’une solution de la protéine à l’étude dont la concentration est connue et diluée dans le même tampon.

L’écran de configuration de l’application Protein A280 Pro apparaît après avoir sélectionné cette application depuis l’onglet Acclaro Pro sur la page d’accueil. Pour afficher les paramètres de l’application Protein A280 sur l’écran de mesure Protein A280, sélectionnez l’icône Settings_Gear00176.png.

 

 

Paramètre

Options disponibles

Coefficient d’ext. de masse (l/gm-cm)

Description

Auto Naming (nom automatique)

Activé ou désactivé

S.O.

Lorsque cette fonction est activée, chaque échantillon se voit attribuer un nom par défaut commençant par le mot « sample » suivi du numéro de l’échantillon dans la séquence. Par exemple, le premier échantillon sera nommé « Sample 1 », le deuxième « Sample 2 », et ainsi de suite. Vous pouvez modifier le nom de base par défaut et remplacer tout nom d’échantillon.

Baseline correction (correction de la ligne de base)

Activé ou désactivé

Saisir la longueur d’onde de correction de ligne de base en nm ou utiliser la valeur par défaut (340 nm)

S.O.

Corrige tout écart causé par certaines particules capables de diffuser la lumière en soustrayant la valeur d’absorbance obtenue
à une longueur d’onde de correction de ligne de base spécifiée aux valeurs d’absorbance obtenues à toutes les longueurs d’onde du spectre de l’échantillon. Par conséquent, l’absorbance du spectre de l’échantillon est nulle à la longueur d’onde de correction de ligne de base spécifiée.

Conseil : si l’échantillon présente une modification qui absorbe la lumière à 340 nm, sélectionnez une autre longueur d’onde de correction ou désactivez l’option de correction de ligne de base.

 

Sample type (type d’échantillon)a

1 Abs = 1 mg/ml

Référence générale

Recommandé lorsque le coefficient d’extinction est inconnu et qu’une estimation approximative de la concentration des protéines est acceptable, pour les solutions sans autre substance interférente. Suppose qu’une solution protéique à 0,1 % (1 mg/ml) présente une absorbance de 1,0 A à 280 nm (pour un trajet optique de 10 mm), c.-à-d., e1 % = 10.

 

BSA

6,7

Calcule la concentration des protéines BSA (albumine sérique bovine) à l’aide d’un coefficient d’extinction de masse (e) de 6,7 l/gm-cm à 280 nm pour une solution de BSA à 1 % (c.-à-d. 10 mg/ml). Supposant un poids moléculaire de 66 400 daltons (Da), le coefficient d’extinction molaire à 280 nm pour la BSA est d’environ 43 824 M-1cm-1.

 

IgG

13,7

Méthode adaptée à l’analyse de la plupart des anticorps de mammifères (c.-à-d. immunoglobulines G ou IgG). Calcule la concentration de protéines à l’aide d’un coefficient d’extinction de masse (e) de 13,7 l/gm-cm à 280 nm pour une solution d’IgG à 1 % (c.-à-d. 10 mg/ml). Supposant un poids moléculaire de 150 000 daltons (Da), le coefficient d’extinction molaire à 280 nm pour l’IgG est d’environ 210 000 M-1cm-1.

 

Lysozyme

26,4

Calcule la concentration de la protéine lysozyme à l’aide d’un coefficient d’extinction de masse (e) de 26,4 l/gm-cm à 280 nm pour une solution de lysozyme à 1 % (c.-à-d. 10 mg/ml). Suppose que le coefficient d’extinction molaire pour le lysozyme du blanc d’oeuf varie entre 36 000 M-1cm-1 et 39 000 M-1cm-1.

 

Autre protéine
(e + MW)

Coefficient d’extinction molaire et poids moléculaire définis par l’utilisateur

Suppose que la protéine possède un coefficient d’extinction molaire (e) et un poids moléculaire (MW) connus, où :

(emolaire)*10 = (epourcentage)*(MWprotéine)

Saisissez le poids moléculaire en kiloDaltons (kDa) et le coefficient d’extinction molaire (e) en M-1cm-1 divisé par 1 000 (c.-à-d.e/1 000). Par exemple, pour une protéine avec coefficient d’extinction molaire de 210 000 M-1cm-1, saisissez 210.

 

Autre protéine
(e1%)

Coefficient d’extinction de masse défini par l’utilisateur

Suppose que la protéine possède un coefficient d’extinction de masse connu (e). Saisissez le coefficient d’extinction de masse en l/gm-cm pour une solution de protéines à 10 mg/ml (e1 %).

aPour ajouter ou modifier une protéine non répertoriée, utilisez l’éditeur de protéines.