Bonnes pratiques pour les mesures d’acides nucléiques
• Isolez et purifiez les échantillons d’acides nucléiques avant leur analyse pour en retirer les impuretés. Selon l’échantillon, les impuretés peuvent inclure de l’ADN, de l’ARN, des nucléotides libres, des protéines, certains composants tampons et des colorants. Consultez la rubrique Préparation des échantillons pour plus d’informations.
Remarque Les réactifs d’extraction tels que la guanidine, le phénol et l’EDTA contribuent à une absorbance comprise entre 230 nm et 280 nm et influeront sur les résultats de mesure s’ils sont présents dans les échantillons (même en quantités résiduelles). |
• Vérifiez que l’absorbance de l’échantillon se situe dans les limites de détection d’absorbance de l’instrument.
• Effectuez le blanc de l’instrument avec la même solution tampon que celle utilisée pour mettre en suspension l’analyte d’intérêt. La solution de blanc doit avoir un pH et une force ionique similaires à ceux de la solution d’analyte.
• Exécutez un cycle à blanc pour évaluer la contribution de votre solution tampon à l’absorbance. Si le tampon présente une forte absorbance à la longueur d’onde d’analyse (typiquement 260 nm) ou à proximité de celle-ci , vous devrez envisager d’opter pour un autre tampon ou une autre application. Consultez la rubrique Choisir et mesurer un blanc pour obtenir des informations supplémentaires.
• Pour les mesures de micro-volumes :
–Assurez-vous que la surface des socles a été correctement nettoyée et conditionnée.
–Si possible, chauffez les échantillons hautement concentrés ou contenant de grosses molécules, tels que l’ADN génomique ou lambda, jusqu’à 63°C (145°F) et mélangez délicatement (mais minutieusement) chaque échantillon au vortex avant son analyse. Évitez d’introduire des bulles d’air lors des étapes de mélange et de pipetage.
–Respectez les bonnes pratiques pour les mesures de micro-volumes.
–Utilisez un volume d’échantillon de 1 à 2 µl. Consultez la rubrique Volumes d’échantillon recommandés pour obtenir des informations supplémentaires.
• Pour les mesures en cuvettes (instruments NanoDrop UltraC et NanoDrop UltraC FL uniquement), utilisez des cuvettes compatibles et respectez les bonnes pratiques pour les mesures en cuvettes.
• Mesurer un échantillon micro-volume
• Mesurer un échantillon à l’aide d’une cuvette
• Bonnes pratiques pour les mesures de micro-volumes
• Bonnes pratiques pour les mesures en cuvettes