Mesurer avec la méthode Oligo DNA Pro ou Oligo RNA Pro (Oligo ADN/ARN Pro)

Utilisez les applications Oligo DNA Pro et Oligo RNA Pro (Oligo ADN/ARN Pro) pour quantifier les oligonucléotides qui absorbent à 260 nm avec une précision accrue à des concentrations élevées (> 62,5 A). Les coefficients d’extinction molaire sont calculés automatiquement en fonction de la séquence des bases de l’échantillon définie par l’utilisateur. Ces applications calculent la concentration d’acides nucléiques et génèrent deux rapports d’absorbance (A260/A280 et A260/A230). Il est aussi possible d’appliquer une correction de ligne de base à partir d’un seul point.

 

 

 

Avant de commencer...

Avant de procéder à toute mesure sur socle, relevez le bras de l’instrument NanoDrop Ultra et nettoyez les socles supérieur et inférieur. Au minimum, essuyez les  socles avec une nouvelle lingette de laboratoire. Pour plus d’informations, consultez la rubrique Nettoyer les socles.

Remarque Si l’oligonucléotide a été modifié, par exemple par l’ajout d’un fluorochrome, consultez le fabricant de l’oligonucléotide pour déterminer si cette modification contribue à l’absorbance à 260 nm. Si c’est le cas, nous vous recommandons d’utiliser l’application Microarray (biopuce) pour quantifier la concentration d’acides nucléiques. L’application Microarray  (biopuce) applique une correction afin de soustraire au résultat de quantification des oligonucléotides toute contribution due à l’absorbance du colorant.

AVIS    

N’utilisez pas de burette ou de flacon pulvérisateur sur ou à proximité de l’instrument car les liquides s’écouleraient dans l’instrument et pourraient causer des dommages irrémédiables.

N’utilisez pas d’acide fluorhydrique (HF) sur les socles. Les ions fluorures corroderaient irrémédiablement les câbles à fibre optique en quartz.

 

Procédure

1. Sur la page d’accueil, sélectionnez l’onglet Acclaro Pro  puis soit Oligo DNA Pro soit Oligo ARN Pro, selon vos besoins.

2. Modifiez autant d’options de configuration que souhaité et sélectionnez Save (enregistrer).

3. Pipetez 1 à 2 µl de solution de blanc sur le socle inférieur et abaissez le bras.

4. Sélectionnez Blank (effectuer le blanc) et attendez que la mesure soit terminée.

Conseil : si le mode Auto-Blank (blanc automatique) est activé, la mesure du blanc commencera automatiquement lorsque vous abaissez le bras.

5. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire.

6. Pipetez 1 à 2 µl de solution d’échantillon sur le socle.

7. Démarrez la mesure de l’échantillon :

Si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé, abaissez le bras ; si le mode Auto-Measure est désactivé, abaissez le bras et sélectionnez Measure. (mesurer).

Une fois la mesure de l’échantillon terminée, le spectre et les valeurs rapportées sont affichés (voir la section suivante).

8. Lorsque vous avez terminé de mesurer les échantillons, sélectionnez End Experiment (terminer l’expérience).

9. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire.

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