Mesurer avec la méthode Proteins and Labels (protéines et marqueurs)

Utilisez l’application Proteins and Labels (protéines et marqueurs) pour quantifier les protéines et les fluorochromes de conjugués pour puces à protéines, ainsi que les métalloprotéines telles que l’hémoglobine, en se fondant sur les rapports de longueur d’onde. Cette application fournit la concentration de protéines mesurée
à 280 nm, un rapport d’absorbance A260/A280, ainsi que les concentrations et les valeurs d’absorbance mesurées des fluorochromes, étant capable de détecter des concentrations aussi faibles que 0,2 picomole par microlitre. Ces informations sont utiles pour évaluer la conjugaison protéine/colorant (degré de marquage) à utiliser dans les applications en aval.

Avant de commencer...

Avant de procéder à toute mesure sur socle, relevez le bras de l’instrument NanoDrop Ultra et nettoyez les socles supérieur et inférieur. Au minimum, essuyez les  socles avec une nouvelle lingette de laboratoire. Pour plus d’informations, consultez la rubrique Nettoyer les socles.

AVIS    

N’utilisez pas de burette ou de flacon pulvérisateur sur ou à proximité de l’instrument car les liquides s’écouleraient dans l’instrument et pourraient causer des dommages irrémédiables.

N’utilisez pas d’acide fluorhydrique (HF) sur les socles. Les ions fluorures corroderaient irrémédiablement les câbles à fibre optique en quartz.

 

Procédure

1. Sur la page d’accueil, sélectionnez l’onglet Proteins (protéines) puis appuyez sur Protein & Labels. (protéines et marqueurs).

2. Modifiez autant d’options de configuration que souhaité et sélectionnez Save (enregistrer).

Protein_Lab_Setup.png

 

Conseil : sélectionnez un colorant dans la liste prédéfinie ou ajoutez un colorant non répertorié à l’aide de l’éditeur de colorants/chromophores.

3. Si vous utilisez un modèle NanoDrop Ultrac ou NanoDrop Ultrac FL, sélectionnez le bon support d’analyse.

Si vous utilisez des cuvettes, sélectionnez Cuvette dans le menu déroulant en haut de l’écran. Les paramètres relatifs aux cuvettes s’afficheront. Sélectionnez la longueur du trajet optique, la vitesse d’agitation et la température qui vous conviennent, puis fermez le menu déroulant.

Si vous mesurez à l’aide des socles, conservez le paramètre Pedestal (socle) sélectionné en haut de l’écran.

4. Pipetez 1 à 2 µl de solution de blanc sur le socle inférieur et abaissez le bras, ou insérez la cuvette de blanc dans le porte-cuvette.

 

Conseil : si vous utilisez une cuvette, veillez à aligner son trajet optique à celui de l’instrument.

5. Sélectionnez Blank (effectuer le blanc) et attendez que la mesure soit terminée.

Conseil : si le mode Auto-Blank (blanc automatique) est activé, la mesure du blanc commencera automatiquement lorsque vous abaissez le bras. (Cette option n’est pas disponible pour les mesures en cuvettes.)

6. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette de blanc.

7. Pipetez 2 µl de solution d’échantillon sur le socle et abaissez le bras, ou insérez la cuvette d’échantillon dans le porte-cuvette.

8. Démarrez la mesure de l’échantillon :

Socle : si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé, abaissez le bras ; si le mode Auto-Measure est désactivé, abaissez le bras et sélectionnez Measure. (mesurer).

Cuvette : sélectionnez Measure (mesurer).

Une fois la mesure de l’échantillon terminée, le spectre et les valeurs rapportées sont affichés (voir la section suivante).

9. Lorsque vous avez terminé de mesurer les échantillons, sélectionnez End Experiment (terminer l’expérience).

10. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette d’échantillon.

FE_Image_34.png

 

 

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