Mesurer la fluorescence de l’ADNdb ou de l’ARN

Utilisez les applications dsDNA Fluorescence et RNA Fluorescence (fluorescence ADNdb/ARN) en association avec les kits NanoDrop Ultra Fluorescence pour quantifier des échantillons d’ADNds ou d’ARN. Ces applications calculent la concentration d’acides nucléiques. Les kits NanoDrop Ultra dsDNA Broad Range (BR) Fluorescence, dsDNA High Sensitivity (HS) Fluorescence et RNA High Sensitivity (HS) Fluorescence contiennent des colorants sélectifs qui émettent une fluorescence uniquement lorsqu’ils sont liés à leur molécule cible.

Avant de commencer...

Avant de procéder à toute mesure sur socle, relevez le bras de l’instrument NanoDrop Ultra et nettoyez les socles supérieur et inférieur. Au minimum, essuyez les  socles avec une nouvelle lingette de laboratoire. Pour plus d’informations, consultez la rubrique Nettoyer les socles. Consultez la rubrique Utilisation des courbes d’étalonnages pour plus d’informations sur les options disponible lors de la création d’une courbe d’étalonnage.

AVIS   

N’utilisez pas de burette ou de flacon pulvérisateur sur ou à proximité de l’instrument car les liquides s’écouleraient dans l’instrument et pourraient causer des dommages irrémédiables.

N’utilisez pas d’acide fluorhydrique (HF) sur les socles. Les ions fluorures corroderaient irrémédiablement les câbles à fibre optique en quartz.

Préparation des échantillons et des étalons

Pour plus d’informations sur la préparation des étalons et des échantillons de cette analyse, consultez les instructions du kit que vous utilisez.

Mesurer des étalons et des échantillons d’acides nucléiques par fluorescence

1. Sur la page d’accueil, sélectionnez l’onglet Fluorescence  puis l’application dsDNA Fluorescence (fluorescence ADNdb) ou RNA Fluorescence (fluorescence ARN), selon les échantillons à mesurer.

2. Lorsque vous utilisez de l’ADNdb, sélectionnez une des options proposées. L’application dsDNA Fluorescence propose les options High Sensitivity (haute sensibilité) et Broad range (plage large), dont les plages dynamiques sont différentes. L’application RNA Fluorescence propose uniquement l’option de haute sensibilité et n’offre donc pas de choix entre options.

High_Broad.png

3. Modifiez autant d’options de configuration que souhaité et sélectionnez Save (enregistrer).

4. Mesurez les étalons (sautez cette étape si vous utilisez une courbe d’étalonnage existante).

Remarque  Une fois les étalons mesurés, le paramètre du volume échantillon/réaction peut être modifié pour chaque échantillon en sélectionnant Settings_Gear00130.png en haut de l’écran, au besoin.

a.Transférez 2 µl du tube d’analyse préparé contenant l’étalon n° 1 sur le socle inférieur et abaissez le bras.

Si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé Auto-meas-on-ico.png, l’analyse commencera automatiquement lorsque vous abaissez le bras.

Si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est désactivé Auto-meas-off-ico.png, abaissez le bras et sélectionnez Measure (mesurer).Pour démarrer l’analyse.

Remarque  Utilisez toujours une nouvelle aliquote de 2 µl pour chaque mesure.

b.Une fois la mesure terminée, essuyez les socles supérieur et inférieur à l’aide d’une lingette sèche de laboratoire pour en retirer l’échantillon.

c.Si le nombre défini de réplicats est supérieur à 1, répétez la mesure jusqu’à ce que tous les réplicats soient mesurés.

d.Répétez les sous-étapes ci-dessus pour l’étalon n° 2, et mesurez le nombre adéquat de réplicats.

e.Lorsque les deux étalons et tous les réplicats ont été mesurés, un message s’affiche vous donnant l’option de mesurer à nouveau les étalons ou de démarrer l’analyse des échantillons.

f.Quand vous avez terminé de mesurer les étalons, sélectionnez Measure Samples (mesurer les échantillons).

5. Mesurer les échantillons

a.Saisissez ou modifiez l’identifiant de l’échantillon en haut de l’écran en cochant la case et en saisissant un nouveau nom d’échantillon.

b.Transférez 2 µl du tube de test contenant l’échantillon correspondant sur le socle inférieur et abaissez le bras.

Si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé Auto-meas-on-ico00131.png, l’analyse commencera automatiquement lorsque vous abaissez le bras.

Si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est désactivé Auto-meas-off-ico00132.png, abaissez le bras et sélectionnez Measure (mesurer) pour commencer l’analyse.

Remarque  Utilisez toujours une nouvelle aliquote de 2 µl pour chaque mesure.

c.Une fois la mesure de l’échantillon terminée, les valeurs rapportées sont affichées (voir la section suivante).

d.Une fois la mesure terminée, essuyez les socles supérieur et inférieur à l’aide d’une lingette sèche de laboratoire pour en retirer l’échantillon.

e.Répétez ces sous-étapes pour mesurer tous les échantillons restants (en répondant aux sollicitations à l’écran).

f.Lorsque vous avez terminé de mesurer les échantillons, sélectionnez End Experiment (terminer l’expérience).

6. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire.