Protéine Pierce 660

Cette méthode mesure la concentration totale en protéines d’échantillons de protéines non purifiés à l’aide d’un agent de détection colorimétrique breveté.

Mesurer avec la méthode Protein Pierce 660

Résultats rapportés

Paramètres

Limites de détection

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Principe de l’analyse Protein Pierce 660

L’analyse Protein Pierce 660 est fondée sur la liaison entre un complexe colorant-métal breveté et les protéines en milieu acide. Cette réaction induit un décalage du pic d’absorbance du colorant, qui est mesuré à 660 nm. Le complexe colorant-métal, de couleur marron-rouge, vire au vert lorsqu’il se lie à des protéines. Ce changement de couleur résulte de la déprotonation du colorant à faible pH, qui est facilitée par ses interactions avec les groupes d’acides aminés chargés positivement des protéines. Le colorant interagit principalement avec les résidus basiques des protéines tels que l’histidine, l’arginine et la lysine et, dans une moindre mesure, la tyrosine, le tryptophane et la phénylalanine. Le produit du dosage est mesuré à 660 nm et corrigé pour la ligne de base en se fondant sur la valeur d’absorbance à 750 nm.

La couleur émise par cette réaction est stable et augmente de façon proportionnelle à la concentration des protéines, sur une grande plage de mesure. Il est possible d’ajouter un agent de compatibilité avec les détergents ioniques (IDCR) au réactif du test pour le rendre plus compatible avec les détergents ioniques, y compris le tampon d’échantillon SDS Laemmli avec bleu de bromophénol, s’ils sont présents en grande quantité. L’IDCR se dissout entièrement s’il est bien mélangé et n’a aucun effet sur l’analyse. Vous pouvez vous procurer des kits préformulés du réactif IDCR chez Thermo Scientific ou auprès d’un distributeur local. Pour plus d’informations sur l’IDCR, consultez les renseignements fournis par le fabricant du kit.

Kits et protocoles d’analyse des protéines

Veuillez consulter le site Web de NanoDrop pour connaître les derniers kits et protocoles pour instruments NanoDrop Ultra. Suivez les recommandations du fabricant du kit d’analyse pour la manipulation de tous les étalons et échantillons (non déterminés). Veillez à traiter chacun d’entre eux dans les mêmes délais et à la même température tout au long de l’analyse.

Les étalons de protéines servant à créer une courbe d’étalonnage peuvent également être fournis par le fabricant du kit. Étant donné que les socles du NanoDrop Ultra peuvent mesurer des concentrations de protéines plus élevées que les spectrophotomètres à cuvette traditionnels, vous devrez éventuellement fournir vos propres étalons de protéines dont les concentrations seront plus fortes que celles du fabricant. Par exemple, il peut s’avérer nécessaire d’utiliser des étalons supplémentaires pour que la courbe d’étalonnage couvre la gamme de mesures dynamique de l’analyse et la plage attendue des valeurs des échantillons à déterminer.

Courbes d’étalonnage Protein Pierce

L’analyse colorimétrique de protéines nécessite une courbe d’étalonnage.

Chaque expérience nécessite une courbe d’étalonnage. Vous pouvez créer une nouvelle courbe d’étalonnage en sélectionnant l’option Setup Standards (configurer les étalons) ou importer les étalons utilisés lors d’une expérience précédente en sélectionnant l’option Load Standards (charger des étalons) sur l’écran de configuration de l’application.

Pour plus d’informations, consultez la rubrique Utilisation des courbes d’étalonnage.