Mesurer avec la méthode Protein BCA

La méthode Protein BCA repose sur l’utilisation d’acide bicinchonique comme réactif de détection colorimétrique pour déterminer la concentration totale en protéines d’échantillons de protéines non purifiés. Cette application est utile pour mesurer les solutions de protéines diluées ou de protéines en présence de composants qui absorbent de façon significative entre 200 nm et 280 nm, permettant ainsi d’exclure les mesures directes de protéines à 280 nm et 205 nm. Cette application mesure l’absorbance à 562 nm et se fonde sur une courbe d’étalonnage pour calculer la concentration des protéines.Il est aussi possible d’appliquer une correction de ligne de base à partir d’un seul point.

AVIS   

N’utilisez pas de burette ou de flacon pulvérisateur sur ou à proximité de l’instrument car les liquides s’écouleraient dans l’instrument et pourraient causer des dommages irrémédiables.

N’utilisez pas d’acide fluorhydrique (HF) sur les socles. Les ions fluorures corroderaient irrémédiablement les câbles à fibre optique en quartz.

 

Avant de commencer...

Avant de procéder à toute mesure sur socle, relevez le bras de l’instrument NanoDrop Ultra et nettoyez les socles supérieur et inférieur. Au minimum, essuyez les socles avec une nouvelle lingette de laboratoire.Pour plus d’informations, consultez la rubrique Nettoyer les socles.

Procédure

1. Sur la page d’accueil, sélectionnez l’onglet Proteins (protéines) puis, appuyez sur Protein BCA.

2. Modifiez autant d’ options de configuration ique souhaité et sélectionnez Save (enregistrer). (Précisez le type de courbe et le nombre de réplicats pour chaque étalon et saisissez la concentration de chaque étalon.)

Conseil: pour cette méthode, sous l’option Curve Type (type de courbe), nous vous recommandons de choisir « Linear » (linéaire).

3. ISi vous utilisez un modèle NanoDrop Ultrac ou NanoDrop Ultrac FL, sélectionnez le bon support d’analyse.

Si vous utilisez des cuvettes, sélectionnez Cuvette dans le menu déroulant en haut de l’écran. Les paramètres relatifs aux cuvettes s’afficheront. Sélectionnez la longueur du trajet, la vitesse d’agitation et le contrôle de la température, puis fermez le menu déroulant.

Si vous mesurez à l’aide des socles, conservez le paramètre Pedestal (socle) sélectionné en haut de l’écran.

4. Mesurer le blanc :

Pipetez 2 µl d’H2O DI sur le socle inférieur et abaissez le bras, ou insérez une cuvette de blanc remplie d’H2O DI dans le porte-cuvette.

Conseil: si vous utilisez une cuvette, veillez à aligner son trajet optique à celui de l’instrument.

Sélectionnez Blank (effectuer le blanc) et attendez que la mesure soit terminée.

Conseil: si le mode Auto-Blank (blanc automatique) est activé, la mesure du blanc commencera automatiquement lorsque. (This option is not available for cuvette measurements).

Lift arm and clean both pedestals with new laboratory wipe, or remove cuvette.

5. Measure reference standard:

Pipetez 2 µl de solution de référence sur le socle, ou insérez une cuvette de référence (la solution de référence ne doit contenir aucune des protéines utilisées pour l’étalon ; consultez la rubrique Utilisation des courbes d’étalonnage pour plus de détails).

Sélectionnez Measure (mesurer) et attendez que la mesure soit terminée.

Conseil: si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé, la mesure du blanc débute automatiquement lorsque vous abaissez le bras.

Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette.

If Replicates setting is greater than 1, repeat measurement.

6. Mesurer l’étalon de référence :

Pipetez 2 µl d’étalon 1 sur le socle, ou insérez une cuvette d’étalon 1.

Sélectionnez Measure (mesurer) et attendez que la mesure soit terminée.

Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette.

Si vous avez défini un nombre de réplicats supérieur à 1, répétez la mesure.

Répétez les sous-étapes ci-dessus pour chaque étalon supplémentaire (lorsque le nombre spécifié d’étalons et de réplicats a été analysé, un message s’affiche vous demandant de choisir l’une des options suivantes : mesurer à nouveau les étalons, charger d’autres étalons ou démarrer l’analyse des échantillons).

Quand vous avez terminé de mesurer les étalons, appuyez soit sur Measure Samples ((mesurer les échantillons) (balayez vers la gauche pour afficher la courbe d’étalonnage) si vous utilisez le logiciel de contrôle local soit sur l’onglet Curve (courbe) si vous utilisez le logiciel de contrôle PC.

7. Mesurer les échantillons :

Pipetez 2 µl de l’échantillon  1 sur le socle, ou insérez la cuvette d’échantillon 1.

Sélectionnez Measure (mesurer) aet attendez que la mesure soit terminée.

Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette.

Si vous avez défini un nombre de réplicats supérieur à 1, répétez la mesure.

8. Lorsque vous avez terminé de mesurer les échantillons, sélectionnez
End Experiment (terminer l’expérience).

9. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette d’échantillon.

Sujets connexes

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Fonctionnement de base de l’instrument