Mesurer avec la méthode Protein A280   280

Utilisez l’application Protéine A280 pour quantifier les échantillons de protéines purifiés qui contiennent les acides aminés tels que le tryptophane ou la tyrosine, ou les liaisons disulfides cys-cys, qui présentent une absorption à 280 nm. Cette application calcule la concentration de protéines mesurée à 280 nm et génère un rapport d’absorbance (A260/A280). Il est aussi possible d’appliquer une correction de ligne de base à partir d’un seul point. Cette application ne nécessite pas de courbe d’étalonnage.

Avant de commencer...

Avant de prendre des mesures du pied avec l’un des instruments NanoDrop Ultra, soulèvez le bras de l’instrument et nettoyez les pieds supérieur et inférieur. Au minimum, essuyez les  socles avec une nouvelle lingette de laboratoire. Pour plus d’informations, consultez la rubrique Nettoyer les socles.

Remarque  Si vos échantillons contiennent principalement des liaisons peptidiques et peu ou pas d’acides aminés, utilisez l’application Protein A205 au lieu de l’application Protein A280 Pro.

AVIS    

N’utilisez pas de flacon pulvérisateur sur ou à proximité de l’instrument car les liquides s’écouleraient dans l’instrument et pourraient causer des dommages irrémédiables.

N’utilisez pas d’acide fluorhydrique (HF) sur les socles. Les ions fluorures corroderaient irrémédiablement les câbles à fibre optique en quartz.

Procédure

1. Sur la page d’accueil, sélectionnez l’onglet Proteins (protéines) puis appuyez sur Protein A280.

2. Modifiez autant d’options de configuration que souhaité et sélectionnez Save (enregistrer).

3. Si vous utilisez un modèle NanoDrop Ultrac ou NanoDrop Ultrac FL, sélectionnez le bon support d’analyse.

Lorsque vous utilisez une sonde, dans le menu déroulant en haut de l’écran, sélectionnez Cuette pour afficher les paramètres de la sonde.
Sélectionnez la longueur du trajet optique, la vitesse d’agitation et la température qui vous conviennent, puis fermez le menu déroulant.

Si vous mesurez à l’aide des socles, conservez le paramètre Pedestal (socle) sélectionné en haut de l’écran.

4. Pipetez 1 à 2 µl de solution de blanc sur le socle inférieur et abaissez le bras, ou insérez la cuvette de blanc dans le porte-cuvette.

 

Conseil : si vous utilisez une cuvette, veillez à aligner son trajet optique à celui de l’instrument.

5. Sélectionnez Blank (effectuer le blanc) et attendez que la mesure soit terminée.

Conseil : si le mode Auto-Blank (blanc automatique) est activé, la mesure du blanc commencera automatiquement lorsque vous abaissez le bras. (Cette option n’est pas disponible pour les mesures en cuvettes.)

6. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette de blanc.

7. Pipetez 2 à 2 µl de solution d’échantillon sur le socle ou insérez la cuvette d’échantillon dans le porte-cuvette.

8. Démarrez la mesure de l’échantillon :

Socle : si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé, abaissez le bras ; si le mode Auto-Measure est désactivé, abaissez le bras et sélectionnez Measure. (mesurer).

Cuvette : selectionnez Measure (mesurer).

Une fois la mesure de l’échantillon terminée, le spectre et les valeurs rapportées sont affichés (voir la section suivante).

9. Lorsque vous avez terminé de mesurer les échantillons, sélectionnez End Experiment (terminer l’expérience).

10. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette d’échantillon.

 

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112612_NanoDrop_One_Protein_A280_Low_Drawing.png