Mesurer des échantillons marqués au fluorochrome

Utilisez l’application Fluorometer (fluoromètre) pour mesurer la fluorescence émise par divers échantillons marqués au fluorochrome. Cette application fonctionne de la même manière que les applications dsDNA Fluorescence et RNA Fluorescence : elle se fonde sur une courbe d’étalonnage créée au préalable pour déterminer la concentration des échantillons mesurés. Cette application permet d’utiliser d’autres kits d’analyse qu’uniquement les kits NanoDrop Ultra BR/HS Fluorescence.

 

Avant de commencer...

Avant de procéder à toute mesure sur socle, relevez le bras de l’instrument NanoDrop Ultra et nettoyez les socles supérieur et inférieur. Au minimum, essuyez les  socles avec une nouvelle lingette de laboratoire. Pour plus d’informations, consultez la rubrique Nettoyer les socles.

AVIS    

N’utilisez pas de burette ou de flacon pulvérisateur sur ou à proximité de l’instrument car les liquides s’écouleraient dans l’instrument et pourraient causer des dommages irrémédiables.

N’utilisez pas d’acide fluorhydrique (HF) sur les socles. Les ions fluorures corroderaient irrémédiablement les câbles à fibre optique en quartz.

Préparation des échantillons et des étalons

Pour plus d’informations sur la préparation des étalons et des échantillons de cette analyse, consultez les instructions du kit que vous utilisez.

Consultez la rubrique Utiliser une courbe d’étalonnage pour plus d’informations sur les options disponible lors de la création d’une courbe d’étalonnage.

Mesurer des étalons et les échantillons marqués au fluorochrome par la fluorescence

1. Sur la page d’accueil, sélectionnez l’onglet Fluorescence, puis l’option Fluorometer. (fluoromètre).

2. Sélectionnez l’une des options de LED d’excitation (bleue ou rouge).

Blue-Red.png

 

3. Modifiez autant d’options de configuration que souhaité et sélectionnez Save (enregistrer).

4. Mesurez les étalons (sautez cette étape si vous utilisez une courbe d’étalonnage existante) :

a.Transférez 2 µl du tube d’analyse préparé contenant l’échantillon de référence sur le socle inférieur et abaissez le bras. Cette solution de référence ne doit pas contenir d’analyte d’intérêt.

Si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est désactivé Auto-meas-off-ico00137.png, sélectionnez Measure (mesurer) pour commencer la mesure.

Si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé Auto-meas-on-ico00138.png, la mesure commencera automatiquement lorsque vous abaissez le bras.

Remarque  Utilisez toujours une nouvelle aliquote de 2 µl pour chaque mesure.

b.Une fois la mesure terminée, essuyez les socles supérieur et inférieur à l’aide d’une lingette sèche de laboratoire pour en retirer l’échantillon.

c.Si le nombre défini de réplicats est supérieur à 1, répétez la mesure jusqu’à ce que tous les réplicats soient mesurés.

Répétez les sous-étapes ci-dessus pour l’étalon n° 1 et tous les autres étalons, et mesurez le nombre adéquat de réplicats pour chacun.

Lorsque tous les étalons et tous les réplicats ont été mesurés, un message s’affiche vous donnant l’option de mesurer à nouveau les étalons, de charger des étalons supplémentaires ou de démarrer la mesure des échantillons.

Quand vous avez terminé de mesurer les étalons, sélectionnez Measure Samples (mesurer les échantillons).

5. Mesurer les échantillons :

a.Saisissez ou modifiez l’identifiant de l’échantillon en haut de l’écran en cochant la case et en saisissant un nouveau nom d’échantillon.

b.Transférez 2 µl du tube de test contenant l’échantillon correspondant sur le socle inférieur et abaissez le bras.

Si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est désactivé Auto-meas-off-ico00139.png, sélectionnez Measure (mesurer) pour commencer la mesure.

Si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé Auto-meas-on-ico00140.png, la mesure commencera automatiquement lorsque vous abaissez le bras.

Remarque  Utilisez toujours une nouvelle aliquote de 2 µl pour chaque mesure.

c.Une fois la mesure de l’échantillon terminée, la courbe d’étalonnage et les valeurs rapportées sont affichées (voir la section suivante).

d.Une fois la mesure terminée, essuyez les socles supérieur et inférieur à l’aide d’une lingette sèche de laboratoire pour en retirer l’échantillon.

e.Répétez ces sous-étapes pour mesurer tous les échantillons restants (en répondant aux sollicitations à l’écran).

f.Lorsque vous avez terminé de mesurer les échantillons, sélectionnez End Experiment (terminer l’expérience).

6. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire.

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