Bonnes pratiques pour les mesures de protéines
• Isolez et purifiez les échantillons de protéines avant leur analyse pour en retirer les impuretés. Selon l’échantillon, les impuretés peuvent comprendre de l’ADN, de l’ARN et certains composants du tampon. Consultez la rubrique Préparation des échantillons pour plus d’informations.
Remarque Les réactifs d’extraction qui contribuent à une absorbance comprise entre 200 nm et 280 nm influeront sur les résultats de mesure s’ils sont présents dans les échantillons (même en quantités résiduelles). |
• Vérifiez que l’absorbance de l’échantillon se situe dans les limites de détection d’absorbance de l’instrument.
• Choisir un blanc :
–Pour les applications Protéine A280, Protéine A205 et Protéines et étiquettes, vider avec la même solution tampon utilisée pour suspendre l’analyte d’intérêt. La solution de blanc doit avoir un pH et une force ionique similaires à ceux de la solution d’analyte.
–Pour les applications concernant la protéine BCA, la protéine Bradford et la protéine Lowry, à blanc avec de l’eau déionisée (DI H 2 O).
–Pour l’application Protéine Perce 660, vider la solution de référence utilisée pour établir la courbe standard (la solution de référence ne doit contenir aucune des stock de protéines standard). Pour plus d’informations, consultez la rubrique Utilisation des courbes d’étalonnage.
• Exécutez un cycle à blanc pour évaluer la contribution de votre solution tampon à l’absorbance. Si le tampon présente une forte absorbance à la longueur d’onde d’analyse (généralement 280 nm) ou à proximité de celle-ci, vous devrez envisager d’opter pour un tampon différent ou une autre application, telle qu’une analyse colorimétrique (p. ex., BCA ou Pierce 660). Consultez la rubrique Choisir et mesurer un blanc pour obtenir des informations supplémentaires.
Remarque Les tampons tels que le Triton X, le RIPA et le NDSB présentent une absorbance significative et ne sont pas compatibles avec les mesures A280 directes. |
• Pour les mesures de micro-volumes :
–Assurez-vous que la surface des socles a été correctement nettoyée et conditionnée. (Les protéines ont tendance à adhérer aux surfaces des socles.)
–Mélangez délicatement (mais minutieusement) les échantillons au vortex avant de les mesurer. Évitez d’introduire des bulles d’air lors des étapes de mélange et de pipetage.
–Respectez les bonnes pratiques pour les mesures de micro-volumes.
–Utilisez un volume d’échantillon de 2 µl. Consultez la rubrique Volumes d’échantillon recommandés pour obtenir des informations supplémentaires.
• Pour les mesures en cuvettes (instruments NanoDrop UltraC et NanoDrop UltraC FL uniquement), utilisez des cuvettes compatibles et respectez les bonnes pratiques pour les mesures en cuvettes.
• Bonnes pratiques pour les mesures de protéines
• Mesurer un échantillon micro-volume
• Mesurer un échantillon à l’aide d’une cuvette
• Préparer les échantillons et les blancs
• Fonctionnement de base de l’instrument