Mesurer avec la méthode Protein A205

Utilisez l’application Protein A205 pour quantifier des peptides purifiés et autres protéines  contenant des liaisons peptidiques, qui présentent une absorbance à 205 nm. Cette application calcule la concentration des protéines et génère deux valeurs d’absorbance (A205 et A280). Il est aussi possible d’appliquer une correction de ligne de base à partir d’un seul point. Cette application ne nécessite pas de courbe d’étalonnage.

Avant de commencer...

Avant de procéder à toute mesure sur socle, relevez le bras de l’instrument NanoDrop Ultra et nettoyez les socles supérieur et inférieur. Au minimum, essuyez les  socles avec une nouvelle lingette de laboratoire. Pour plus d’informations, consultez la rubrique Nettoyer les socles.

Remarque  Si vos échantillons contiennent principalement des acides aminés tels que le tryptophane ou la tyrosine, ou des liaisons disulfides cys-cys, utilisez l’application Protein A280 au lieu de l’application Protein A205.

AVIS    

N’utilisez pas de burette ou de flacon pulvérisateur sur ou à proximité de l’instrument car les liquides s’écouleraient dans l’instrument et pourraient causer des dommages irrémédiables.

N’utilisez pas d’acide fluorhydrique (HF) sur les socles. Les ions fluorures corroderaient irrémédiablement les câbles à fibre optique en quartz.

 

Procédure

1. Sur la page d’accueil, sélectionnez l’onglet Proteins (protéines) puis appuyez sur Protein A205.

2. Modifiez autant d’options de configuration que souhaité et sélectionnez Save (enregistrer).

3. Si vous utilisez un modèle NanoDrop Ultrac ou NanoDrop Ultrac FL, sélectionnez le bon support d’analyse.

Si vous utilisez des cuvettes, sélectionnez Cuvette dans le menu déroulant en haut de l’écran. Les paramètres relatifs aux cuvettes s’afficheront. Sélectionnez la longueur du trajet optique, la vitesse d’agitation et la température qui vous conviennent, puis fermez le menu déroulant.

Si vous mesurez à l’aide des socles, conservez le paramètre Pedestal (socle) sélectionné en haut de l’écran.

4. Pipetez 1 à 2 µl de solution de blanc sur le socle inférieur et abaissez le bras, ou insérez la cuvette de blanc dans le porte-cuvette.

Conseil : si vous utilisez une cuvette, veillez à aligner son trajet optique à celui de l’instrument.

5. Sélectionnez Blank (effectuer le blanc) et attendez que la mesure soit terminée.

Conseil : si le mode Auto-Blank (blanc automatique) est activé, la mesure du blanc commencera automatiquement lorsque vous abaissez le bras. (Cette option n’est pas disponible pour les mesures en cuvettes.)

6. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette de blanc.

7. Pipetez 2 µl de solution d’échantillon sur le socle et abaissez le bras, ou insérez la cuvette d’échantillon dans le porte-cuvette.

8. Démarrez la mesure de l’échantillon :

Socle : si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé, abaissez le bras ; si le mode Auto-Measure est désactivé, abaissez le bras et sélectionnez Measure. (mesurer).

Cuvette : selectionnez Measure (mesurer).

Une fois la mesure de l’échantillon terminée, le spectre et les valeurs rapportées sont affichés (voir la section suivante).

9. Lorsque vous avez terminé de mesurer les échantillons, sélectionnez End Experiment (terminer l’expérience).

10. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette d’échantillon.

 

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