Mesurer avec la méthode Protein Pierce 660

La méthode Protein Pierce 660 repose sur l’utilisation d’un composé breveté qui se lie aux protéines comme réactif de détection colorimétrique pour déterminer la concentration totale en protéines d’échantillons de protéines non purifiés. Cette application convient aux solutions protéiques qui contiennent des concentrations élevées de détergents, d’agents réducteurs et d’autres réactifs couramment utilisés. L’application Protein Pierce 660 mesure l’absorbance à 660 nm et utilise une courbe  d’étalonnage pour calculer la concentration de protéines (consultez la rubrique Utilisation des courbes d’étalonnage pour plus d’informations). Une correction de la ligne de base à partir d’un seul point est appliquée.

 

 

Avant de commencer...

Avant de procéder à toute mesure sur socle, relevez le bras de l’instrument NanoDrop Ultra et nettoyez les socles supérieur et inférieur. Au minimum, essuyez les  socles avec une nouvelle lingette de laboratoire. Pour plus d’informations, consultez la rubrique Nettoyer les socles.

AVIS   

N’utilisez pas de burette ou de flacon pulvérisateur sur ou à proximité de l’instrument car les liquides s’écouleraient dans l’instrument et pourraient causer des dommages irrémédiables.

N’utilisez pas d’acide fluorhydrique (HF) sur les socles. Les ions fluorures corroderaient irrémédiablement les câbles à fibre optique en quartz.

 

Procédure

1. Sur la page d’accueil, sélectionnez l’onglet Proteins (protéines) puis appuyez sur Protein Pierce 660.

2. Modifiez autant d’options de configuration que souhaité et sélectionnez Save (enregistrer). (Précisez le type de courbe et le nombre de réplicats pour chaque étalon et saisissez la concentration de chaque étalon.)

Conseil : pour cette méthode, sous l’option Curve Type (type de courbe), nous vous recommandons de choisir « Linear » (linéaire).

3. Si vous utilisez un modèle NanoDrop Ultrac ou NanoDrop Ultrac FL, sélectionnez le bon support de mesure.

Si vous utilisez des cuvettes, sélectionnez Cuvette dans le menu déroulant en haut de l’écran. Les paramètres relatifs aux cuvettes s’afficheront. Sélectionnez la longueur du trajet, la vitesse d’agitation et le contrôle de la température, puis fermez le menu déroulant.

Si vous mesurez à l’aide des socles, conservez le paramètre Pedestal (socle) sélectionné en haut de l’écran.

4. Mesurer le blanc :

Pipetez 2 µl de solution de référence sur le socle inférieur et abaissez le bras, ou insérez la cuvette de blanc remplie de solution de référence dans le porte-cuvette (la solution de référence la solution ne doit contenir aucune des protéines utilisées pour l’étalon ; consultez la rubrique Utilisation  des courbes d’étalonnage pour plus de détails).

Conseil : si vous utilisez une cuvette, veillez à aligner son trajet optique à celui de l’instrument.

Sélectionnez Blank (effectuer le blanc) et attendez que la mesure soit terminée.

Conseil : si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé, la mesure du blanc débute automatiquement lorsque vous abaissez le bras. (Cette option n’est pas disponible pour les mesures en cuvettes.)

Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette.

5. Mesurer l’étalon de référence :

Pipetez 2 µl de solution de référence sur le socle, ou insérez une cuvette de référence (la solution de référence ne doit contenir aucune des protéines utilisées pour l’étalon ; consultez la rubrique Utilisation des courbes d’étalonnage pour plus de détails).

Sélectionnez Measure (mesurer) et attendez que la mesure soit terminée.

Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette.

Si vous avez défini un nombre de réplicats supérieur à 1, répétez la mesure.

6. Mesurer les autres étalons :

Pipetez 2 µl d’étalon 1 sur le socle, ou insérez une cuvette d’étalon 1.

Sélectionnez Measure (mesurer) et attendez que la mesure soit terminée.

Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette.

Si vous avez défini un nombre de réplicats supérieur à 1, répétez la mesure.

Répétez les sous-étapes ci-dessus pour chaque étalon supplémentaire (lorsque le nombre spécifié d’étalons et de réplicats a été analysé, un message s’affiche vous demandant de choisir l’une des options suivantes : mesurer à nouveau les étalons, charger d’autres étalons ou démarrer l’analyse des échantillons).

Quand vous avez terminé de mesurer les étalons, appuyez soit sur Measure Samples(mesurer les échantillons) (balayez vers la gauche pour afficher la courbe d’étalonnage) si vous utilisez le logiciel de contrôle local soit sur l’onglet Curve (courbe) si vous utilisez le logiciel de contrôle PC.

7. Mesurer les échantillons :

Pipetez 2 µl de l’échantillon 1 sur le socle, ou insérez la cuvette d’échantillon 1.

Sélectionnez Measure (mesurer) et attendez que la mesure soit terminée.

Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette.

Si vous avez défini un nombre de réplicats supérieur à 1, répétez la mesure.

8. Lorsque vous avez terminé de mesurer les échantillons, sélectionnez End Experiment (terminer l’expérience).

9. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire, ou retirez la cuvette d’échantillon.

 

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