Mesurer avec la méthode Protein A280 Pro

Utilisez l’application Protein A280 pour quantifier des échantillons de protéines purifiés qui contiennent des acides aminés tels que le tryptophane ou la tyrosine, ou des liaisons disulfides cys-cys, et qui absorbent à 280 nm avec une précision accrue à des concentrations plus élevées (> 62,5 A). Cette application calcule la concentration de protéines mesurée à 280 nm et génère un rapport d’absorbance (A260/A280). Il est aussi possible d’appliquer une correction de ligne de base à partir d’un seul point. Cette application ne nécessite pas de courbe d’étalonnage.

 

 

Avant de commencer...

Avant de procéder à toute mesure sur socle, relevez le bras de l’instrument NanoDrop Ultra et nettoyez les socles supérieur et inférieur. Au minimum, essuyez les  socles avec une nouvelle lingette de laboratoire. Pour plus d’informations, consultez la rubrique Nettoyer les socles.

Remarque Si vos échantillons contiennent principalement des liaisons peptidiques et peu ou pas d’acides aminés, utilisez l’application Protein A205 au lieu de l’application Protein A280 Pro.

AVIS  

N’utilisez pas de burette ou de flacon pulvérisateur sur ou à proximité de l’instrument car les liquides s’écouleraient dans l’instrument et pourraient causer des dommages irrémédiables.

N’utilisez pas d’acide fluorhydrique (HF) sur les socles. Les ions fluorures corroderaient irrémédiablement les câbles à fibre optique en quartz.

Procédure

1. Sur la page d’accueil, sélectionnez l’onglet Acclaro Pro puis appuyez sur Protein A280 Pro.

2. Modifiez autant d’options de configuration que souhaité et sélectionnez Save (enregistrer).

3. Pipetez 1 à 2 µl de solution de blanc sur le socle inférieur et abaissez le bras.

4. Sélectionnez Blank (effectuer le blanc) et attendez que la mesure soit terminée.

Conseil : si le mode Auto-Blank (blanc automatique) est activé, la mesure du blanc commencera automatiquement lorsque vous abaissez le bras.

5. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire.

6. Pipetez 2 µl de solution d’échantillon sur le socle.

7. Démarrez la mesure de l’échantillon :

Si le mode Auto-Measure (mesure automatique) est activé, abaissez le bras ; si le mode Auto-Measure est désactivé, abaissez le bras et sélectionnez Measure. (mesurer).

Une fois la mesure de l’échantillon terminée, le spectre et les valeurs rapportées sont affichés (voir la section suivante).

8. Lorsque vous avez terminé de mesurer les échantillons, sélectionnez End Experiment (terminer l’expérience).

9. Relevez le bras et nettoyez les deux socles avec une nouvelle lingette de laboratoire.

 

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