Messung von Protein BCA

Der Protein-BCA-Assay verwendet Bicinchoninsäure als kolorimetrisches Nachweisreagenz, um die Gesamtproteinkonzentration in ungereinigten Proteinproben zu bestimmen. Diese Anwendung ist nützlich für die Messung verdünnter Proteinlösungen oder Proteine bei Vorhandensein von Komponenten, die eine signifikante Extinktion zwischen 200 nm und 280 nm aufweisen, was direkte Proteinmessungen bei 280 nm oder 205 nm ausschließt. Diese Anwendung misst die Extinktion bei 562 nm und verwendet eine Standardkurve, um die Proteinkonzentration zu berechnen. Eine Einzelpunkt-Basislinienkorrektur wird vorgenommen.

NOTICE    

Verwenden Sie keine Spritzen oder Sprühflasche auf oder in der Nähe des Geräts, da Flüssigkeiten in das Gerät fließen und dauerhafte Schäden verursachen können.

Verwenden Sie an den Messplätzen keine Fluorwasserstoffsäure (HF). Fluoridionen schädigen die Quarzglasfaserkabel dauerhaft.

 

Vor Beginn...

Bevor Sie die Messungen mit dem NanoDrop Ultra-Gerät durchführen, stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie die oberen und unteren Messplätze. Wischen Sie die Messplätze mindestens mit einem neuen Labor-Wischtuch ab. Weitere Informationen finden Sie unter Reinigung der Messplätze.

Verfahren

1. Wählen Sie auf dem Startbildschirm die Registerkarte Proteins (Proteine) und dann Protein BCA.

2. Konfigurieren Sie bei Bedarf beliebige der Einstellungsoptionen  und wählen Sie Save (Speichern). (Geben Sie einen Kurventyp und die Anzahl der Replikate für jeden Standard ein sowie die Konzentration von jedem Standard.)

Tipp: Für diesen Assay empfehlen wir die Einstellung von Curve Typ (Kurventyp) auf „Linear“.

3. Wenn Sie ein NanoDrop Ultrac- oder NanoDrop Ultrac FL-Modell verwenden, wählen Sie den richtigen Messpfad aus.

Wenn Sie eine Küvette verwenden, wählen Sie im Dropdown-Menü oben auf dem Bildschirm Cuvette (Küvette) aus, um die Küvetteneinstellungen anzuzeigen. Wählen Sie die gewünschte Schichtdicke, Rührgeschwindigkeit und Heizleistung aus und schließen Sie dann das Dropdown-Menü.

Wenn Sie den Messplatz für Messungen verwenden, lassen Sie Pedestal (Messplatz) als ausgewählte Einstellung oben auf dem Bildschirm.

4. Leerwertmessung:

Pipettieren Sie 2 µl DI H2O auf den unteren Messplatz und senken Sie den Arm, oder setzen Sie eine Leerwertküvette mit DI H2O in den Küvettenhalter ein

Tipp: Wenn Sie eine Küvette verwenden, achten Sie darauf, den Lichtweg der Küvette mit dem Lichtweg des Geräts abzugleichen.

Tippen Sie auf Blank (Leerprobe) und warten Sie, bis die Messung beendet ist.

Tipp: Wenn Auto-Blank (automatischer Leerwert) aktiviert ist, startet die Leerwertmessung automatisch, nachdem Sie den Gerätearm gesenkt haben. (Diese Option ist für Küvettenmessungen nicht verfügbar.)

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Labortuch oder entfernen Sie die Küvette.

5. Messen des Referenzstandards:

Pipettieren Sie 2 μl Referenzlösung auf den Messplatz oder setzen Sie die Referenzküvette ein (die Referenzlösung sollte keine der Standard Proteine enthalten; weitere Informationen finden Sie unter Arbeiten mit Standardkurven).

Wählen Sie Measure (Messen) aus und warten Sie, bis die Messung abgeschlossen ist.

Tipp: Wenn Auto-Measure (Auto-Messung) aktiviert (On) ist, startet die Standardmessung automatisch, nachdem Sie den Gerätearm gesenkt haben. (Diese Option ist für Küvettenmessungen nicht verfügbar.)

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Wischtuch oder entfernen Sie die Küvette.

Wenn die Einstellung für Wiederholungen größer als 1 ist, wiederholen Sie die Messung.

6. Messung der verbleibenden Standards:

Pipettieren Sie 2 µl von Standard 1 auf den Messplatz oder setzen Sie die Standard 1-Küvette ein.

Wählen Sie Measure (Messen) aus und warten Sie, bis die Messung abgeschlossen ist.

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Wischtuch oder entfernen Sie die Küvette.

Wenn die Einstellung für Wiederholungen größer als 1 ist, wiederholen Sie die Messung.

Wiederholen Sie die obigen Teilschritte für jeden weiteren Standard (wenn die angegebene Anzahl von Standards und Wiederholungen gemessen wurde, werden Sie in einer Meldung gefragt, ob die Standards erneut gemessen oder weitere Standards geladen werden sollen oder mit der Messung von Proben begonnen werden soll).

Wenn Sie die Messung der Standards beendet haben, wählen Sie Measure Samples (Proben messen) (nach links wischen, um die Standardkurve zu sehen), wenn Sie die lokale Steuerungssoftware verwenden, oder wählen Sie die Registerkarte Curve (Kurve), wenn Sie die PC-Steuerungssoftware verwenden.

7. Proben messen:

Pipettieren Sie 2 µL Probe 1 auf den Messplatz oder setzen Sie die Küvette von Probe 1 ein.

Wählen Sie Measure Samples (Proben messen)  und warten Sie, bis die Messung abgeschlossen ist.

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Wischtuch oder entfernen Sie die Küvette.

Wenn die Einstellung für Wiederholungen größer als 1 ist, wiederholen Sie die Messung.

8. Wenn Sie mit dem Messen der Proben fertig sind, wählen Sie End Experiment (Versuch beenden).

9. Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Wischtuch oder entfernen Sie die Probenküvette.

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