Messen von dsDNA-Fluoreszenz oder RNA-Fluoreszenz
Verwenden Sie die dsDNA-Fluoreszenz- und RNA-Fluoreszenz-Anwendungen in Kombination mit den NanoDrop Ultra Fluoreszenz-Assays, um dsDNA- oder RNA-Proben zu quantifizieren. Diese Anwendungen ermitteln die Nukleinsäurekonzentration. Die NanoDrop Ultra dsDNA Broad Range (BR), dsDNA High Sensitivity (HS) und RNA High Sensitivity (HS) Fluoreszenz-Assays enthalten selektive Farbstoffe, die nur fluoreszieren, wenn sie an das Zielmolekül gebunden sind.
Vor Beginn...
Bevor Sie die Messungen mit dem NanoDrop Ultra-Gerät durchführen, stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie die oberen und unteren Messplätze. Sie sollten die Messplätze wenigstens mit einem frischen Labortuch abwischen. Weitere Informationen finden Sie unter „Reinigung der Messplätze“. Weitere Informationen zu den verfügbaren Optionen beim Erstellen einer Standardkurve finden Sie unter „Arbeiten mit Standardkurven“.
NOTICE • Verwenden Sie keine Spritz- oder Sprühflasche an oder in der Nähe des Instruments, da Flüssigkeiten in das Gerät eindringen und permanente Schäden verursachen können. • Verwenden Sie an den Messplätzen keine Fluorwasserstoffsäure (HF). Fluoridionen schädigen die Quarzglasfaserkabel dauerhaft. |
Vorbereitung von Proben- und Standards
Anweisungen zur Vorbereitung der Teststandards und Proben finden Sie in der Anleitung, die dem von Ihnen verwendeten Test beiliegt.
Messen von Nukleinsäurestandards und -proben mittels Fluoreszenz
1. Wählen Sie auf dem Startbildschirm die Registerkarte Fluorescene und dann je nach den zu messenden Proben tippen Sie auf dsDNA Fluorescene oder RNA Fluorescene aus.
2. Wählen Sie beim Arbeiten mit dsDNA eine der Assay-Optionen aus. Die dsDNA-Fluoreszenzanwendung verfügt sowohl über die Option High Sensitivity (Hohe Empfindlichkeit) als auch über die Option Broad Range (breites-Spektrum), die unterschiedliche dynamische Bereiche aufweisen. Die RNA-Fluoreszenz-Anwendung verfügt nur über die Option High Sensitivity (Hohe Empfindlichkeit), sodass keine Auswahl erforderlich ist.
3. Passen Sie bei Bedarf eine der setup options (Einstellungsoptionen) an und klicken Sie auf Save (Speichern).
4. Standards messen (überspringen Sie diesen Schritt, wenn Sie eine bereits vorhandene Standardkurve verwenden).
Note Nach der Messung der Standards kann die Option Sample to Reaction Volume (Probe-zu-Reaktionsvolumen) für jede Probe geändert werden, indem |
a.Pipettieren Sie 2 µl des vorbereiteten Teströhrchens mit Standard Nr. 1 auf den unteren Messplatz und senken Sie den Gerätearm ab.
•Wenn Auto-Measure (Auto-Messung) auf On (Ein) steht , beginnt die Messung automatisch, sobald der Gerätearm abgesenkt wird.
•Wenn Auto-Measure (Auto-Messung) deaktiviert (Off/Aus) ist , senken Sie den Gerätearm und wählen Sie Measure (Messen).
Note Verwenden Sie für jede Messung immer ein frisches 2 µl-Aliquot. |
b.Entfernen Sie nach Abschluss der Messung die Probe mit einem trockenen Labortuch vom oberen und unteren Messplatz.
c.Wenn die Einstellung für Wiederholungen größer als 1 ist, wiederholen Sie die Messung, bis alle Wiederholungen abgeschlossen sind.
d.Wiederholen Sie die obigen Teilschritte für Standard Nr. 2, einschließlich zusätzlicher Wiederholungsmessungen.
e.Wenn sowohl die Standards als auch alle Wiederholungen gemessen wurden, wird eine Meldung mit Optionen zum erneuten Messen der Standards oder zum Beginn der Probenmessung angezeigt.
f.Wenn Sie die Messung der Standards beendet haben, wählen Sie Measure Samples (Proben messen).
5. Proben messen.
a.Geben Sie die Proben-ID oben auf dem Bildschirm ein oder bearbeiten Sie sie, indem Sie das Feld auswählen und einen neuen Probennamen eingeben.
b.Pipettieren Sie 2 µl der Probe aus dem Teströhrchen auf den unteren Messplatz und senken Sie den Gerätearm ab.
•Wenn Auto-Measure (Auto-Messung) auf On (Ein) steht , beginnt die Messung automatisch, sobald der Gerätearm abgesenkt wird.
•Wenn Auto-Measure deaktiviert (Off/Aus) ist , senken Sie den Gerätearm und wählen Sie Measure (Messen) um die Messung zu Starten.
Note Verwenden Sie für jede Messung immer ein frisches 2 µl-Aliquot. |
c.Wenn die Probenmessung beendet ist, werden das Spektrum und die gemessenen Werte angezeigt (siehe nächster Abschnitt).
d.Entfernen Sie nach Abschluss der Messung die Probe mit einem trockenen Labortuch vom oberen und unteren Messplatz.
e.Wiederholen Sie diese Teilschritte, um alle verbleibenden Proben zu messen (folgen Sie den Anweisungen auf dem Bildschirm).
f.Wenn das Messen der Proben beendet ist, tippen Sie auf End Experiment (Experiment beenden).
6. Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Labortuch.