Bewährte Methoden für Proteinmessungen
• Isolieren und reinigen Sie die Proteinproben vor der Messung, um Verunreinigungen zu entfernen. Je nach Probe kann es sich bei den Verunreinigungen um DNA, RNA und bestimmte Pufferkomponenten handeln. Weitere Informationen finden Sie unter Probenvorbereitung.
Note Extraktionsreagenzien, die zur Extinktion zwischen 200 nm und 280 nm beitragen, beeinflussen die Messergebnisse, wenn sie in den Proben vorhanden sind (auch in Restmengen). |
• Vergewissern Sie sich, dass sich die Probenabsorption innerhalb der Extinktionsdetektionsgrenzen des Geräts befindet.
• Auswahl eines Leerwerts:
–Für die Anwendungen Protein A280, Protein A205 und Proteine und Etiketten mit derselben Pufferlösung leeren, die zum Resuspendieren des interessierenden Analyten verwendet wurde. Die Leerwertlösung sollte einen ähnlichen pH-Wert und eine ähnliche Ionenstärke wie die Analytlösung aufweisen.
–Für die Anwendungen Protein BCA, Protein Bradford und Protein Lowry leeren Sie mit entionisiertem Wasser (DI H 2 O).
–Für die Protein-Pierce-660-Anwendung: Leerstelle mit der Referenzlösung, die zum Erstellen der Standardkurve verwendet wurde (die Referenzlösung sollte keines der Standard-Proteinstammdaten). Weitere Informationen finden Sie unter Arbeiten mit Standardkurven.
• Führen Sie einen Leerwertzyklus durch, um den Exktinktionsbeitrag Ihrer Pufferlösung zu bestimmen. Wenn der Puffer bei oder in der Nähe der Analysewellenlänge (normalerweise 280 nm) eine starke Extinktion aufweist, müssen Sie möglicherweise einen anderen Puffer oder eine andere Anwendung wählen, beispielsweise einen kolorimetrischen Assay (z. B. BCA oder Pierce 660). Weitere Informationen finden Sie unter „Auswahl und Messung einer Leerprobe“.
Note Puffer wie Triton X, RIPA und NDSB tragen erheblich zur Extinktion bei und sind nicht mit direkten E280-Messungen kompatibel. |
• Für Mikrovolumenmessungen:
–Stellen Sie sicher, dass die Messplätze ordnungsgemäß gereinigt und konditioniert sind. (Proteine neigen dazu, an den Oberflächen des Messplatzes zu haften.)
–Mischen Sie die Proben vorsichtig (aber gründlich) im Vortexmischer, bevor Sie eine Messung durchführen. Vermeiden Sie beim Mischen und Pipettieren Blasenbildung.
–Halten Sie sich an bewährte Methoden für Mikrovolumenmessungen.
–Verwenden Sie ein Probenvolumen von 2 µl. Gehen Sie zu Empfohlene Probenvolumina für weitereInformationen.
• Für Küvettenmessungen (nur NanoDrop UltraC und NanoDrop UltraC FL-Geräte) sind kompatible Küvetten zu verwenden und die bewährten Methoden für Küvettenmessungen zu befolgen.
• Bewährte Methoden für Proteinmessungen
• Messen einer Mikrovolumenprobe
• Messen einer Probe mit einer Küvette
• Vorbereiten von Proben und Leerwerten
• Grundlegende Gerätefunktionen