Berechnungen

Wie bei den Nukleinsäureanwendungen wird auch bei den OD600-Anwendungen eine Modifikation der Beer-Lambert-Gleichung verwendet, um die Probenkonzentration zu berechnen, bei der der Extinktionskoeffizient und die Schichtdicke kombiniert und als „Faktor“ bezeichnet werden.

Die OD600-Anwendung bietet einen benutzerdefinierten Faktor, der in Verbindung mit dem Beer'schen Gesetz zur Berechnung der Probenkonzentration verwendet werden kann. Wenn der Faktor bekannt ist, tragen Sie ihn ein. Ansonsten verwenden Sie 1 x 108. Dies ist der allgemein anerkannte Faktor für die meisten Bakterienzellsuspensionen wie z. B. E. coli.

 

Messwert

E600 Extinktion

Hinweis: Bei Extinktionsmessungen von Mikrovolumina und Messungen mit nicht standardisierten Küvetten (andere Küvetten als 10 mm-Küvetten) werden die Spektren auf das Äquivalent einer 10 mm-Schichtdicke normalisiert.

 

Die Extinktionswerte der Zellkultur werden bei 600 nm unter Verwendung des normierten Spektrums gemessen. Wenn keine Extinktionskorrektur angegeben ist, ist dies der berichtete E600-Wert und der Wert, der zur Berechnung der Zellkonzentration verwendet wird.

Falls eine Extinktionskorrektur angegeben ist, wird der normierte und (Extinktions-)korrigierte Extinktionswert bei 600 nm berichtet und zur Berechnung der Zellkonzentration verwendet.

A(l) Extinktion

Der normierte und (Extinktions-)korrigierte Extinktionswert (falls verwendet) bei einer angegebenen zusätzlichen überwachten Wellenlänge (l) wird ebenfalls berichtet.

Die berechneten Zellkonzentrationen basieren auf dem Extinktionswert bei 600 nm, dem verwendeten Faktor und der Schichtdicke der Probe. Es kann auch eine Einzelpunkt-Extinktionskorrektur vorgenommen werden.

 

Probenschichtdicke

Die Software wählt für Messungen von Mikrovolumen die optimale Schichtdicke, (zwischen 1,0 mm und 0,03 mm) basierend auf der Extinktion der Probe bei der Analysewellenlänge aus.

Bei Küvettenmessungen wird die nach dem Umschalten in den Küvettenmodus ausgewählte Schichtdicke verwendet. (siehe Küvetteneinstellungen).

Die dargestellten Spektren und Extinktionswerte sind auf eine äquivalente Schichtdicke von 10 mm normiert.

 

 

Berichtete Werte

Zellkonzentration. In Zellen/ml angegeben. Die Berechnungen basieren auf der Beer-Lambert-Gleichung unter Verwendung des korrigierten E600-Extinktionswerts.