Bewährte Methoden für Nukleinsäuremessungen

Isolieren und reinigen Sie Nukleinsäureproben vor der Messung, um Verunreinigungen zu entfernen. Je nach Probe kann es sich bei den Verunreinigungen um DNA, RNA, freie Nukleotide, Proteine, bestimmte Pufferkomponenten und Farbstoffe handeln. Weitere Informationen finden Sie unter Probenvorbereitung.

Note  Die Extraktionsreagenzien Guanidin, Phenol und EDTA absorbieren zwischen 230 nm und 280 nm und beeinflussen die Messergebnisse, wenn sie in den Proben (auch in Restmengen) vorhanden sind.

Vergewissern Sie sich, dass sich die Probenabsorption innerhalb der Extinktionsdetektionsgrenzen des Geräts befindet.

Messen Sie die Leerprobe mit derselben Pufferlösung, die zum Resuspendieren des betreffenden Analyten verwendet wurde. Die Leerprobenlösung sollte einen ähnlichen pH-Wert und eine ähnliche Ionenstärke wie die Analytlösung aufweisen.

Führen Sie einen Leerprobenzyklus durch, um den Exktinktionsbeitrag Ihrer Pufferlösung zu bestimmen. Wenn der Puffer bei oder in der Nähe einer Analysewellenlänge (in der Regel 260 nm) eine starke Extinktion zeigt, müssen Sie möglicherweise einen anderen Puffer oder eine andere Anwendung wählen. Weitere Informationen finden Sie unter „Auswahl und Messung einer Leerprobe“.

Für Mikrovolumen-Messungen:

Stellen Sie sicher, dass die Messplätze ordnungsgemäß gereinigt und konditioniert sind.

Wenn möglich, erhitzen Sie hochkonzentrierte oder großmolekulare Proben, wie genomische oder Lambda-DNA, auf 63 °C (145 °F) und vortexen Sie sie vorsichtig (aber gründlich), bevor Sie eine Messung durchführen. Vermeiden Sie beim Mischen und Pipettieren Blasenbildung.

Halten Sie sich an bewährte Methoden für Messungen von Mikrovolumen.

Verwenden Sie ein Probenvolumen von 1–2 µL. Weitere Informationen finden Sie unter „Empfohlene Probenvolumina“.

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