Protein Lowry messen

Das Protein Lowry-Assay verwendet Folin-Ciocalteu als kolorimetrische Nachweisreagenz zur Bestimmung der Gesamtproteinkonzentration in nicht aufgereinigten Proteinproben. Diese Anwendung ist eine Alternative zu anderen kolorimetrischen Anwendungen zum Messen von verdünnten Proteinlösungen oder Proteinen in Gegenwart von Komponenten, die eine signifikante Extinktion zwischen 200 nm und 280 nm aufweisen. Diese Anwendung misst die Extinktion bei 650 nm und verwendet eine Standardkurve, um die Proteinkonzentration zu berechnen. Weitere Informationen finden Sie unter Arbeiten mit Standardkurven. Eine Einzelpunkt-Basislinienkorrektur wird vorgenommen.

Vor Beginn...

Bevor Sie die Messungen mit dem NanoDrop Ultra-Gerät durchführen, stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie die oberen und unteren Messplätze. Sie sollten die Messplätze wenigstens mit einem frischen Labortuch abwischen. Weitere Informationen finden Sie unter „Reinigung der Messplätze“.

NOTICE    

Verwenden Sie keine Spritz- oder Sprühflasche an oder in der Nähe des Instruments, da Flüssigkeiten in das Gerät eindringen und permanente Schäden verursachen können.

Verwenden Sie an den Messplätzen keine Fluorwasserstoffsäure (HF). Fluoridionen schädigen die Quarzglasfaserkabel dauerhaft.

Verfahren

1. Wählen Sie auf dem Startbildschirm die Registerkarte Proteine und dann Protein Lowry.

2. Passen Sie bei Bedarf eine der setup options (Einstellungsoptionen) an und klicken Sie auf Save (Speichern).

Tipp: Für diesen Assay empfehlen wir, den Kurventyp auf „Polynom 2. Grades“ zu setzen.

3. Wenn Sie ein NanoDrop Ultrac- oder NanoDrop Ultrac FL-Modell verwenden, wählen Sie den richtigen Messpfad aus.

Wenn Sie eine Küvette verwenden, wählen Sie im Dropdown-Menü oben auf dem Bildschirm Cuvette (Küvette) aus, um die Küvetteneinstellungen anzuzeigen. Wählen Sie die gewünschte Schichtdicke, Rührgeschwindigkeit und Temperatur aus und schließen Sie dann das Dropdown-Menü.

Wenn Sie den Messplatz für Messungen verwenden, lassen Sie Messplatz als ausgewählte Einstellung oben auf dem Bildschirm.

4. Leerproben-Messung:

Pipettieren Sie 2 μl DI H2O auf den unteren Messplatz und senken Sie den Gerätearm ab, oder setzen Sie eine DI H2O-Leerprobenküvette in den Küvettenhalter ein.

Tipp: Wenn Sie eine Küvette verwenden, achten Sie darauf, den Lichtweg der Küvette mit dem Lichtweg des Geräts auszurichten.

Tippen Sie auf Blank (Leerprobe) und warten Sie, bis die Messung beendet ist.

Tipp: Wenn Auto-Measure (Auto-Messung) aktiviert (On) ist, startet die Standardmessung automatisch, nachdem Sie den Gerätearm gesenkt haben. (Diese Option ist für Küvetten-Messungen nicht verfügbar).

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Labortuch oder entfernen Sie die Küvette.

5. Messen des Referenzstandards:

Pipettieren Sie 2 μl Referenzlösung auf den Messplatz oder setzen Sie die Referenzküvette ein (die Referenzlösung sollte keine der Standard Proteine enthalten; weitere Informationen finden Sie unter Arbeiten mit Standardkurven).

Wählen Sie Measure (Messen) und warten Sie, bis die Messung abgeschlossen ist.

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Tuch oder entfernen Sie die Küvette.

Wenn die Wiederholungseinstellung größer als 1 ist, wiederholen Sie die Messung.

6. Messung der verbleibenden Standards:

Pipettieren Sie 2 µl Standard 1 auf den Messplatz oder setzen Sie die Standard 1-Küvette ein.

Wählen Sie Measure (Messen) und warten Sie, bis die Messung abgeschlossen ist.

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Tuch oder entfernen Sie die Küvette.

Wenn die Wiederholungseinstellung größer als 1 ist, wiederholen Sie die Messung.

Wiederholen Sie die obigen Teilschritte für jeden weiteren Standard (wenn die angegebene Anzahl von Standards und Wiederholungen gemessen wurde, werden Sie gefragt, ob Sie die Standards erneut messen, weitere Standards laden oder mit der Messung von Proben beginnen möchten).

Wenn Sie mit dem Messen der Standards fertig sind, wählen Sie Measure Samples (Proben messen).  (wischen Sie nach links, um die Standardkurve anzuzeigen), wenn Sie die lokale Steuerungssoftware verwenden, oder wählen Sie die Registerkarte Kurve, wenn Sie die PC-Steuerungssoftware verwenden.

7. Proben messen:

Pipettieren Sie 2 µl der Probe 1 auf den Messplatz oder setzen Sie die Probe 1-Küvette ein.

Wählen Sie Measure Samples (Proben messen)  und warten Sie, bis die Messung abgeschlossen ist.

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Tuch oder entfernen Sie die Küvette.

Wenn die Wiederholungseinstellung größer als 1 ist, wiederholen Sie die Messung.

8. Wenn Sie mit dem Messen der Proben fertig sind, wählen Sie End Experiment (Versuch beenden).

9. Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Tuch oder entfernen Sie die Probenküvette.

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