Verwenden Sie die Protein E205-Anwendung, um gereinigte Peptide und andere Proteine zu quantifizieren, die Peptidbindungen enthalten, die eine Extinktion bei 205 nm aufweisen. Diese Anwendung misst die Proteinkonzentration und zwei Extinktionswerte (E205 und E280). Auch eine Einzelpunkt-Basislinienkorrektur kann vorgenommen werden. Für diese Anwendung ist keine Standardkurve erforderlich.
Vor Beginn...
Bevor Sie die Messungen mit dem NanoDrop Ultra-Gerät durchführen, stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie die oberen und unteren Messplätze. Wischen Sie die Messplätze mindestens mit einem neuen Labor-Wischtuch ab. Weitere Informationen finden Sie unter Reinigung der Messplätze.
Note Wenn Ihre Proben hauptsächlich Aminosäuren wie Tryptophan oder Tyrosin oder Cys-Cys-Disulfatbindungen enthalten, verwenden Sie die Protein E280-Anwendung statt Protein E205. |
NOTICE • Verwenden Sie keine Spritzen oder Sprühflasche auf oder in der Nähe des Geräts, da Flüssigkeiten in das Gerät fließen und dauerhafte Schäden verursachen können. • Verwenden Sie an den Messplätzen keine Fluorwasserstoffsäure (HF). Fluoridionen schädigen die Quarzglasfaserkabel dauerhaft. |
Verfahren
1. Wählen Sie auf dem Startbildschirm die Registerkarte Proteins (Proteine) und dann Protein A205 (Protein E205).
2. Passen Sie bei Bedarf eine der setup options (Einstellungsoptionen) an und klicken Sie auf Save (Speichern).
3. Bei Verwendung eines NanoDrop Ultrac oder NanoDrop Ultrac FL-Modells wählen Sie den korrekten Messpfad aus.
–Wenn Sie eine Küvette verwenden, wählen Sie im Dropdown-Menü oben auf dem Bildschirm Cuvette (Küvette) aus, um die Küvetteneinstellungen anzuzeigen. Wählen Sie die gewünschte Schichtdicke, Rührgeschwindigkeit und Heizleistung aus und schließen Sie dann das Dropdown-Menü.
–Wenn Sie den Messplatz für Messungen verwenden, lassen Sie Pedestal (Messplatz) als ausgewählte Einstellung oben auf dem Bildschirm.
4. Pipettieren Sie 1–2 µl der Leerprobe auf den unteren Messplatz und senken Sie den Gerätearm ab, oder setzen Sie die Leerprobenküvette in den Küvettenhalter ein.
Tipp: Wenn Sie eine Küvette verwenden, achten Sie darauf, den Lichtweg der Küvette mit dem Lichtweg des Geräts abzugleichen.
5. Wählen Sie Blank (Leerprobe) und warten Sie, bis die Messung abgeschlossen ist.
Tipp: Wenn Auto-Blank (Auto-Leerprobe) aktiviert ist, startet die Leerprobenmessung automatisch, nachdem Sie den Gerätearm gesenkt haben. (Diese Option ist für Küvettenmessungen nicht verfügbar.)
6. Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Labor-Wischtuch oder entfernen Sie die Leerwertküvette.
7. Pipettieren Sie 2 µL der Probenlösung auf den Messplatz oder setzen Sie die Probenküvette in den Küvettenhalter ein.
8. Starten Sie die Probenmessung:
–Messplatz: Wenn Auto-Measure (Auto-Messung) auf On (Ein) gesetzt ist, senken Sie den Gerätearm ab; wenn Auto-Messung auf Off (Aus) gesetzt ist, senken Sie den Gerätearm ab und tippen Sie auf Measure (Messen).
–Küvette: Tippen Sie auf Measure (Messen).
Wenn die Probenmessung abgeschlossen ist, werden das Spektrum und die berichteten Werte angezeigt (siehe nächster Abschnitt).
9. Wenn Sie mit der Messung der Proben fertig sind, wählen Sie End Experiment (Experiment beenden).
10. Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Wischtuch oder entfernen Sie die Probenküvette.
• Bewährte Methoden für Proteinmessungen
• Messen einer Mikrovolumenprobe
• Messen einer Probe mit einer Küvette
• Vorbereiten von Proben und Leerwerten
• Grundlegende Gerätefunktionen