Bewährte Methoden für Nukleinsäuremessungen
• Isolieren und reinigen Sie die Nukleinsäureproben vor der Messung, um Verunreinigungen zu entfernen. Je nach Probe kann es sich bei den Verunreinigungen um DNA, RNA, freie Nukleotide, Proteine, bestimmte Pufferkomponenten und Farbstoffe handeln. Weitere Informationen finden Sie unter Probenvorbereitung.
Note Die Extraktionsreagenzien Guanidin, Phenol und EDTA absorbieren zwischen 230 nm und 280 nm und beeinflussen die Messergebnisse, wenn sie in den Proben (auch in Restmengen) vorhanden sind. |
• Vergewissern Sie sich, dass sich die Probenabsorption innerhalb der Extinktionsdetektionsgrenzen des Geräts befindet.
• Ermitteln Sie den Leerwert mit derselben Pufferlösung, der auch zur Resuspendierung des betreffenden Analyten verwendet wurde. Die Leerwertlösung sollte einen ähnlichen pH-Wert und eine ähnliche Ionenstärke wie die Analytlösung aufweisen.
• Führen Sie einen Leerwertzyklus durch, um den Exktinktionsbeitrag Ihrer Pufferlösung zu bestimmen. Wenn der Puffer bei oder in der Nähe einer Analysewellenlänge (in der Regel 260 nm) eine starke Extinktion zeigt, müssen Sie möglicherweise einen anderen Puffer oder eine andere Anwendung wählen. Weitere Informationen finden Sie unter Auswahl und Messung eines Leerwerts.
• Für Mikrovolumenmessungen:
–Stellen Sie sicher, dass die Messplätze ordnungsgemäß gereinigt und konditioniert sind.
–Erwärmen Sie vor der Messung nach Möglichkeit hochkonzentrierte oder große Molekülproben, wie z. B. genomische DNA oder Lambda-DNA, auf 63 °C (145 °F) und mischen Sie sie vorsichtig (aber gründlich) im Vortexmischer. Vermeiden Sie beim Mischen und Pipettieren Blasenbildung.
–Halten Sie sich an bewährte Methoden für Mikrovolumenmessungen.
–Verwenden Sie ein Probenvolumen von 1–2 µL. Gehen Sie zu Empfohlene Probenvolumina für weitereInformationen.
• Für Küvettenmessungen (nur NanoDrop UltraC und NanoDrop UltraC FL-Geräte) sind kompatible Küvetten zu verwenden und die bewährten Methoden für Küvettenmessungen zu befolgen.
• Messen einer Mikrovolumenprobe
• Messen einer Probe mit einer Küvette
• Bewährte Methoden für Mikrovolumenmessungen
• Bewährte Methoden für Küvettenmessungen