Messung von Protein Pierce 660

Der Protein Pierce 660-Assay verwendet ein proprietäres Bindematerial als kolorimetrische Nachweisreagenz zur Bestimmung der Gesamtproteinkonzentration in nicht aufgereinigten Proteinproben. Diese Anwendung eignet sich für Proteinlösungen, die hohe Konzentrationen von Detergenzien, Reduktionsmitteln und anderen üblicherweise verwendeten Reagenzien enthalten. Die Anwendung Pierce 660 misst die Extinktion bei 660 nm und verwendet eine Standardkurve, um die Proteinkonzentration zu berechnen (weitere Informationen finden Sie unter Arbeiten mit Standardkurven). Eine Einzelpunkt-Basislinienkorrektur wird vorgenommen.

 

 

Vor Beginn...

Bevor Sie die Messungen mit dem NanoDrop Ultra-Gerät durchführen, stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie die oberen und unteren Messplätze. Sie sollten die Messplätze wenigstens mit einem frischen Labortuch abwischen. Weitere Informationen finden Sie unter „Reinigung der Messplätze“.

NOTICE    

Verwenden Sie keine Spritz- oder Sprühflasche an oder in der Nähe des Instruments, da Flüssigkeiten in das Gerät eindringen und permanente Schäden verursachen können.

Verwenden Sie an den Messplätzen keine Fluorwasserstoffsäure (HF). Fluoridionen schädigen die Quarzglasfaserkabel dauerhaft.

 

Verfahren

1. Wählen Sie auf dem Startbildschirm die Registerkarte Proteins (Proteine) und dann Protein Pierce 660.

2. Konfigurieren Sie bei Bedarf beliebige der Einstellungsoptionen  und wählen Sie Save (Speichern). (Geben Sie für jeden Standard einen Kurven-Typ und die Anzahl der Wiederholungen an und geben Sie die Konzentration jedes Standards ein.)

Tipp: Für diesen Assay empfehlen wir, den Kurven-Typ auf „Linear“ zu setzen.

3. Wenn Sie ein NanoDrop Ultrac- oder NanoDrop Ultrac FL-Modell verwenden, wählen Sie den richtigen Messpfad aus.

Wenn Sie eine Küvette verwenden, wählen Sie im Dropdown-Menü oben auf dem Bildschirm Cuvette (Küvette) aus, um die Küvetteneinstellungen anzuzeigen. Wählen Sie die gewünschte Schichtdicke, Rührgeschwindigkeit und Temperatur aus und schließen Sie dann das Dropdown-Menü.

Wenn Sie den Messplatz für Messungen verwenden, lassen Sie Messplatz als ausgewählte Einstellung oben auf dem Bildschirm.

4. Leerproben-Messung:

Pipettieren Sie 2 µl der Referenzlösung auf den unteren Messplatz und senken Sie den Gerätearm ab oder setzen Sie die Küvette für die Leerprobe der Referenzlösung in den Küvettenhalter ein (die Referenzlösung sollte kein Standardprotein-Stocklösung enthalten; siehe Arbeiten mit Standardkurven für weitere Informationen).

Tipp: Wenn Sie eine Küvette verwenden, achten Sie darauf, den Lichtweg der Küvette mit dem Lichtweg des Geräts auszurichten.

Tippen Sie auf Blank (Leerprobe) und warten Sie, bis die Messung beendet ist.

Tipp: Wenn Auto-Measure (Auto-Messung) aktiviert (On) ist, startet die Standardmessung automatisch, nachdem Sie den Gerätearm gesenkt haben. (Diese Option ist für Küvetten-Messungen nicht verfügbar).

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Labortuch oder entfernen Sie die Küvette.

5. Messen des Referenzstandards:

Pipettieren Sie 2 µl der Referenzlösung auf den Messplatz oder setzen Sie eine Referenzküvette ein (die Referenzlösung sollte keines der Standard-Protein-Stocklösung enthalten, siehe Arbeiten mit Standardkurven für Einzelheiten).

Wählen Sie Measure (Messen) und warten Sie, bis die Messung abgeschlossen ist.

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Tuch oder entfernen Sie die Küvette.

Wenn die Wiederholungseinstellung größer als 1 ist, wiederholen Sie die Messung.

6. Messung der verbleibenden Standards:

Pipettieren Sie 2 µl von Standard 1 auf den Messplatz oder setzen Sie die Standard 1-Küvette ein.

Wählen Sie Measure (Messen) und warten Sie, bis die Messung abgeschlossen ist.

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Tuch oder entfernen Sie die Küvette.

Wenn die Wiederholungseinstellung größer als 1 ist, wiederholen Sie die Messung.

Wiederholen Sie die obigen Teilschritte für jeden weiteren Standard (wenn die angegebene Anzahl von Standards und Wiederholungen gemessen wurde, werden Sie gefragt, ob Sie die Standards erneut messen, weitere Standards laden oder mit der Messung von Proben beginnen möchten).

Wenn Sie mit dem Messen der Standards fertig sind, wählen Sie Measure Samples (Proben messen) (wischen Sie nach links, um die Standardkurve anzuzeigen), wenn Sie die lokale Steuerungssoftware verwenden, oder wählen Sie die Registerkarte Kurve, wenn Sie die PC-Steuerungssoftware verwenden.

7. Proben messen:

Pipettieren Sie 2 µl der Probe 1 auf den Messplatz oder setzen Sie die Probe 1-Küvette ein.

Wählen Sie Measure Samples (Proben messen)  und warten Sie, bis die Messung abgeschlossen ist.

Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Tuch oder entfernen Sie die Küvette.

Wenn die Wiederholungseinstellung größer als 1 ist, wiederholen Sie die Messung.

8. Wenn Sie mit dem Messen der Proben fertig sind, wählen Sie End Experiment (Versuch beenden).

9. Stellen Sie den Gerätearm auf und reinigen Sie beide Messplätze mit einem frischen Tuch oder entfernen Sie die Probenküvette.

 

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