Vorbereitung von Proben und Leerproben

Probenvorbereitung

Isolierung und reinigen Sie die Proben, bevor Sie sie mit dem Gerät messen. Kommerzielle Probenentnahme-Sets sind für diese Zwecke erhältlich, oder verwenden Sie ein internes Protokoll. Nach der Aufreinigung wird das relevante Analyt in der Regel in einer wässrigen Pufferlösung gelöst, bevor er gemessen wird.

Tipp: Jedes Molekül, das Licht bei der Analysewellenlänge absorbiert, trägt zum Gesamtextinktionswert bei, der zum Berechnen der Probenkonzentration verwendet wird.

Stellen Sie sicher, dass die Analytkonzentration innerhalb der Extinktionsnachweisgrenzen des Geräts liegt.

Bei Mikrovolumenmessungen vortexen Sie die Proben vorsichtig (aber gründlich) vor der Messung.

Vermeiden Sie beim Mischen und Pipettieren Blasenbildung.

 

Note  Proben, die in extrem flüchtigem Lösungsmittel wie Hexan gelöst sind, werden am besten mit der Küvetten-Probenoption (nur in NanoDrop Ultra and NanoDrop Ultrac FL  Geräten) gemessen.

Auswahl und Messung einer Leerprobe

Der Puffer, der zum Resuspendieren eines Analyten verwendet wird, kann zur Extinktion beitragen. Das Bestimmen der Leerprobe minimiert den Extinktionsbeitrag aufgrund von Pufferkomponenten aus der Probenmessung. Das resultierende Probenspektrum repräsentiert die Extinktion ausschließlich des relevanten Analyts.

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Für bestmögliche Ergebnisse:

Für die meisten Anwendungen wird eine Leerprobe mit derselben Pufferlösung verwendet, die zum Resuspendieren des betreffenden Analyten verwendet wurde. Die Leerprobenlösung sollte einen ähnlichen pH-Wert und eine ähnliche Ionenstärke wie die Analytlösung aufweisen.

Messen Sie vor jedem Probensatz eine neue Leerprobe. Es ist nicht notwendig, vor jeder Probenmessung eine Leerprobe zu messen, es sei denn, die Proben werden in verschiedenen Pufferlösungen gelöst.

Sie sollten alle 30 Minuten eine neue Leerprobe messen.

Führen Sie eine Bestimmung des Leerwerts durch, um die Eignung Ihrer Leerprobenlösung zu ermitteln, bevor Sie sie für Probenmessungen verwenden.

Das resultierende Spektrum sollte um nicht mehr als 0,02 E oder 0,4 E (10-mm-Äquivalent), je nach Anwendung, über das gesamte Spektrum variieren, insbesondere bei Analysenwellenlängen wie in dem Beispiel unten.

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Wenn das resultierende Spektrum größer als 0,02 E oder 0,4 E (entspricht 10-mm-Äquivalent) ist, je nach Anwendung um die Analysewellenlänge herum, kann diese Pufferlösung die Analyse der Proben beeinträchtigen, insbesondere bei Proben mit niedriger Konzentration. Weitere Informationen finden Sie unten.

Probleme im Zusammenhang mit Leerprobenmessung

Vor der Messung der Leerprobe verblieb ein Rückstand auf dem Messplatz oder in der Küvette. (Die resultierenden Probenspektren können negative Absorptionswerte aufweisen, was darauf hindeutet, dass die Leerprobe in diesem Spektralbereich eine höhere Extinktion aufweist als die Probe.)

Die Leerprobe weist bei der Analyse-Wellenlänge eine höhere Extinktion auf als die unbekannte Probe. (Wenn der als Leerprobe verwendete Puffer sich in der Zusammensetzung von dem zum Resuspendieren der Probe verwendeten Puffer unterscheidet, sind die Messergebnisse falsch.)

Die Probe wurde versehentlich als Leerprobe verwendet. (Die resultierenden Probenspektren können negative Extinktionswerte aufweisen oder in manchen Fällen einem Spiegelbild eines typischen Spektrums einer reinen Nukleinsäure oder eines Proteins ähneln, wie im folgenden Beispiel.)

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Lösungen für Leerprobenprobleme

Reinigen und/oder arbeiten Sie beide Messplätze gründlich auf und dann:

führen Sie die Leerprobenmessung erneut durch, oder

messen Sie eine neue Leerprobe mit einem neuen Aliquot der entsprechenden Pufferlösung und messen Sie dann ein neues Aliquot der unbekannten Probe

Für die meisten Anwendungen wird eine Leerprobe mit derselben Pufferlösung verwendet, die zum Resuspendieren des betreffenden Analyten verwendet wurde. Die Leerprobenlösung sollte einen ähnlichen pH-Wert und eine ähnliche Ionenstärke wie die Analytlösung aufweisen.