Eseguire misurazioni in OD600

Utilizzare l’applicazione OD600 per monitorare il tasso di crescita di colture batteriche o di altre colture cellulari microbiche misurando la densità ottica (assorbanza) della coltura in terreni di crescita a 600 nm. Per correlare l’assorbanza con la concentrazione si utilizzano l’equazione di Beer-Lambert e un fattore di conversione inserito dall’utente. I valori di concentrazione riportati possono essere utilizzati per identificare la fase delle popolazioni cellulari in coltura, per es. logaritmica o esponenziale e stazionaria.

L’applicazione OD600 riporta la concentrazione cellulare in cellule/mL. Può essere utilizzata anche una correzione della linea di base a punto singolo. Questa applicazione non richiede una curva standard.

Prima di cominciare...

Prima di eseguire le misurazioni dal piedistallo con lo strumento NanoDrop Ultra, sollevare il braccio dello strumento e pulire i piedistalli superiore e inferiore. Come procedura minima, pulire i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova. Per ulteriori informazioni, vedere Pulizia dei piedistalli.

 

Nota  A causa della quantità di luce diffusa presente in questo saggio, le letture dell’assorbanza sono in genere molto basse.

AVVISO    

Non utilizzare flaconi a spruzzo o spray sullo strumento o nelle sue vicinanze, poiché i liquidi potrebbero penetrare al suo interno e causare danni permanenti.

Non utilizzare acido fluoridrico (HF) sui piedistalli. Gli ioni fluoruro danneggiano in modo permanente i cavi in fibra ottica di quarzo.

 

Procedura

1. Nella schermata iniziale, selezionare la scheda More Apps (Altre app), quindi selezionare OD600.

2. Configurare tutte le opzioni di configurazione desiderate e selezionare Save (Salva).

3. Se si utilizza un modello NanoDrop Ultrac o NanoDrop Ultrac FL, selezionare il percorso di misurazione corretto.

Se si utilizza una cuvetta, selezionare Cuvette (Cuvetta) dal menu a discesa nella parte superiore dello schermo; in questo modo verranno visualizzate le impostazioni della cuvetta. Selezionare la lunghezza del percorso, la velocità di agitazione e il riscaldamento desiderati, quindi chiudere il menu a discesa.

Quando si utilizza il piedistallo per la misurazione, lasciare selezionata l’opzione Pedestal (Piedistallo) nella parte superiore dello schermo.

4. Pipettare 2 µL di soluzione di bianco (ovvero, la soluzione di terreno in cui sono sospese le cellule  di interesse) sul piedistallo inferiore e abbassare il braccio, oppure inserire la cuvetta con il bianco nel portacuvette.

Suggerimento: se si utilizza una cuvetta, assicurarsi di allineare il percorso ottico della cuvetta con ilpercorso ottico dello strumento.

5. Selezionare Blank (Bianco) e attendere il completamento della misurazione.

Suggerimento: se l’opzione Auto-Blank (Bianco automatico) è attivata, la misurazione del bianco inizia automaticamente quando si abbassa il braccio. (Questa opzione non è disponibile per le misurazioni in cuvetta.)

6. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta per il bianco.

7. Pipettare 2 µL di soluzione campione sul piedistallo e abbassare il braccio, oppure inserire la cuvetta con il campione nel relativo supporto.

8. Avviare la misurazione del campione:

Piedistallo: se l’opzione Auto-Measure (Misurazione automatica) è attivata, abbassare il braccio; se Auto-Measure (Misurazione automatica) è disattivata, abbassare il braccio e selezionare Measure (Misura).

Cuvetta: selezionare Measure (Misura)

Al termine della misurazione del campione, vengono visualizzati lo spettro e i valori riportati (vedere la sezione successiva).

9. Al termine della misurazione dei campioni, selezionare End Experiment (Termina esperimento).

10. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta con il campione.

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