Calcoli

Come per le altre applicazioni per gli acidi nucleici, l’applicazione OD600 utilizza una modifica dell’equazione di Beer-Lambert per calcolare la concentrazione del campione, in cui il coefficiente di estinzione e la lunghezza del percorso vengono combinati e indicati come “fattore”.

L’applicazione OD600 offre un fattore specificato dall’utente, da utilizzare insieme alla legge di Beer per calcolare la concentrazione del campione. Se il fattore è noto, inserirlo. Diversamente, utilizzare 1x108, che è il fattore generalmente accettato per la maggior parte delle sospensioni cellulari batteriche come E. coli.

 

Valori misurati

Assorbanza A600

Nota: le misurazioni dell’assorbanza microvolumetrica e le misurazioni effettuate con cuvette non standard (diverse da 10 mm) sono normalizzate con un equivalente della lunghezza del percorso di 10 mm.

 

I valori di assorbanza delle colture cellulari vengono misurati a 600 nm utilizzando lo spettro normalizzato. Se non si specifica alcuna correzione dell’assorbanza, questo è il valore A600 riportato e il valore usato per calcolare la concentrazione cellulare.

Se si specifica una Correzione dell’assorbanza, il valore di assorbanza a 600 nm, normalizzato e corretto viene riportato e utilizzato per calcolare la concentrazione cellulare.

Assorbanza A(l)

Viene riportato anche il valore di assorbanza normalizzato e corretto (se utilizzato) rilevato a qualsiasi lunghezza d’onda monitorata supplementare (l) specificata.

Le concentrazioni cellulari calcolate si basano sul valore di assorbanza a 600 nm, sul fattore inserito e sulla lunghezza del percorso del campione. Può essere applicata una correzione dell’assorbanza a punto singolo.

 

Lunghezza del percorso del campione

Per le misurazioni microvolumetriche, il software seleziona la lunghezza ottimale del percorso (tra 1,0 mm e 0,03 mm) in base all’assorbanza del campione alla lunghezza d’onda dell’analisi.

Per le misurazioni in cuvetta, viene selezionata la lunghezza del percorso dopo il passaggio alla modalità cuvetta. (Vedere Cuvette Settings (Impostazioni della cuvetta).

Gli spettri e i valori di assorbanza visualizzati sono normalizzati a un equivalente della lunghezza del percorso di 10 mm.

 

 

Valori riportati

Concentrazione cellulare. Riportata in cellule/mL. I calcoli si basano sull’equazione di Beer-Lambert utilizzando il valore di assorbanza A600 corretto.