Eseguire una misurazione in Proteins and Labels (Proteine ed etichette)
Utilizzare l’applicazione Proteins and Labels per quantificare le proteine e i coloranti fluorescenti per coniugati di matrice proteica, nonché metalloproteine come l’emoglobina, utilizzando rapporti di lunghezza d’onda. Questa applicazione riporta la concentrazione proteica misurata a 280 nm, un rapporto di assorbanza A260/A280 e le concentrazioni e i valori di assorbanza misurati dei coloranti, consentendo il rilevamento di concentrazioni di colorante a partire da 0,2 picomoli per microlitro. Queste informazioni sono utili ai fini della valutazione della coniugazione proteina/colorante (grado di etichettatura) per l’uso in applicazioni a valle.
Prima di cominciare...
Prima di eseguire le misurazioni dal piedistallo con lo strumento NanoDrop Ultra, sollevare il braccio dello strumento e pulire i piedistalli superiore e inferiore. Come procedura minima, pulire i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova. Per ulteriori informazioni, vedere Pulizia dei piedistalli.
AVVISO • Non utilizzare flaconi a spruzzo o spray sullo strumento o nelle sue vicinanze, poiché i liquidi potrebbero penetrare al suo interno e causare danni permanenti. • Non utilizzare acido fluoridrico (HF) sui piedistalli. Gli ioni fluoruro danneggiano in modo permanente i cavi in fibra ottica di quarzo. |
Procedura
1. Dalla schermata principale, selezionare la scheda Proteins (Proteine), quindi selezionare Protein & Labels (Proteine ed etichette).
2. Configurare una qualsiasi delle opzioni di configurazione se lo si desidera e selezionare Save (Salva).
Suggerimento: selezionare un colorante dall’elenco predefinito o aggiungere un colorante personalizzato utilizzando l’editor dei coloranti/cromofori.
3. Se si utilizza un modello NanoDrop Ultrac o NanoDrop Ultrac FL, selezionare il percorso di misurazione corretto.
–Se si utilizza una cuvetta, selezionare Cuvette (Cuvetta) dal menu a discesa nella parte superiore dello schermo; in questo modo verranno visualizzate le impostazioni della cuvetta. Selezionare la lunghezza del percorso, la velocità di agitazione e il riscaldamento desiderati, quindi chiudere il menu a discesa.
–Quando si utilizza il piedistallo per la misurazione, lasciare selezionata l’opzione Pedestal (Piedistallo) nella parte superiore dello schermo.
4. Pipettare 1–2 µL di soluzione di bianco sul piedistallo inferiore e abbassare il braccio, oppure inserire la cuvetta con il bianco nel portacuvette.
Suggerimento: se si utilizza una cuvetta, assicurarsi di allineare il percorso ottico della cuvetta con ilpercorso ottico dello strumento.
5. Selezionare Blank (Bianco) e attendere il completamento della misurazione.
Suggerimento: se l’opzione Auto-Blank (Bianco automatico) è attivata, la misurazione del bianco inizia automaticamente quando si abbassa il braccio. (Questa opzione non è disponibile per le misurazioni in cuvetta.)
6. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta per il bianco.
7. Pipettare 2 µL di soluzione campione sul piedistallo e abbassare il braccio, oppure inserire la cuvetta con il campione nel relativo supporto.
8. Avviare la misurazione del campione:
–Piedistallo: se l’opzione Auto-Measure (Misurazione automatica) è attivata, abbassare il braccio; se Auto-Measure (Misurazione automatica) è disattivata, abbassare il braccio e selezionare Measure (Misura).
–Cuvetta: selezionare Measure (Misura).
Al termine della misurazione del campione, vengono visualizzati lo spettro
e i valori riportati (vedere la sezione successiva).
9. Al termine della misurazione dei campioni, selezionare End Experiment (Termina esperimento).
10. Sollevare il braccio e pulire entrambi i piedistalli con una salvietta da laboratorio nuova, oppure rimuovere la cuvetta con il campione.
• Migliori pratiche per la misurazione delle proteine
• Misurazione di un campione microvolumetrico
• Misurazione di un campione utilizzando una cuvetta
• Preparazione dei campioni e dei bianchi
• Operazioni di base dello strumento